| 内容提要 | 第1-6页 |
| 英文缩写 | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 核仁素 | 第12-15页 |
| ·核仁素的概念 | 第12页 |
| ·核仁素的结构 | 第12-13页 |
| ·核仁素的细胞定位 | 第13页 |
| ·核仁素的特性 | 第13-14页 |
| ·核仁素的生物学功能 | 第14-15页 |
| 2 P53 抑癌基因 | 第15-19页 |
| ·p53 家族基因 | 第16-17页 |
| ·p53 基因的功能 | 第17-19页 |
| 3 Nucleolin、P53 与电离辐射 | 第19-20页 |
| 4 本课题深入研究的前景展望 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-42页 |
| 1 主要试剂及器材 | 第22-24页 |
| ·试剂 | 第22-24页 |
| ·器材 | 第24页 |
| 2 主要仪器 | 第24-25页 |
| 3 细胞株 | 第25页 |
| 4 细胞培养试剂的配制 | 第25页 |
| ·DMEM 培养液 | 第25页 |
| ·小牛血清的配制 | 第25页 |
| ·胰酶配制 | 第25页 |
| 5 照射条件 | 第25-26页 |
| 6 细胞样本的处理 | 第26页 |
| ·试剂配置 | 第26页 |
| ·步骤 | 第26页 |
| 7 流式细胞术(Flow cytometry, FCM) | 第26页 |
| ·蛋白表达的检测 | 第26页 |
| 8 蛋白质的提取（在冰上进行） | 第26-28页 |
| ·试剂配置 | 第27-28页 |
| ·胞浆蛋白的提取 | 第28页 |
| ·胞核蛋白的提取 | 第28页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第28页 |
| 9 蛋白质浓度的测定 | 第28-29页 |
| 10 蛋白质免疫印记法（Western Blot） | 第29-31页 |
| ·试剂配制 | 第29页 |
| ·凝胶制备 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第30页 |
| ·转膜及封闭 | 第30-31页 |
| ·抗体的杂交 | 第31页 |
| ·暗室曝光 | 第31页 |
| 11 构建P53-/-细胞模型 | 第31-32页 |
| ·RNAi 载体 | 第31页 |
| ·试剂准备 | 第31页 |
| ·步骤 | 第31-32页 |
| 12 Leptomycin B 的出核抑制 | 第32页 |
| ·Leptomycin B 存储液配置 | 第32页 |
| ·药物浓度及作用时间 | 第32页 |
| 13 逆转录－聚合酶链式反应（RT-PCR） | 第32-34页 |
| ·HEK-293 细胞总RNA 的提取及定量 | 第32-33页 |
| ·逆转录（RT） | 第33页 |
| ·引物设计 | 第33-34页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR） | 第34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第34页 |
| 14 PCR 产物的酶切及载体构建 | 第34-35页 |
| ·PCR 产物及载体的酶切 | 第35页 |
| ·酶切产物电泳切胶回收线性载体 | 第35页 |
| ·载体构建 | 第35页 |
| 15 载体的扩增 | 第35-39页 |
| ·感受态DH5α的制备 | 第35-37页 |
| ·细菌的转化 | 第37页 |
| ·质粒的提取 | 第37-39页 |
| ·质粒的纯化（酚－氯仿抽提） | 第39页 |
| 16 蛋白滞后实验(Protein Supershift) | 第39-41页 |
| ·试剂配制 | 第39-40页 |
| ·凝胶灌制 | 第40-41页 |
| ·上样体系准备 | 第41页 |
| ·电泳后转膜，后续实验同Western Blot | 第41页 |
| 17 统计分析 | 第41-42页 |
| 第三章 实验结果 | 第42-70页 |
| 1 电离辐射对MCF7 细胞Nucleolin 和P53 蛋白表达的影响 | 第42-52页 |
| ·蛋白时程变化分析 | 第42-48页 |
| ·蛋白量效变化分析 | 第48-52页 |
| 2 构建MCF7-P53-/-细胞模型的鉴定 | 第52-53页 |
| 3 电离辐射对MCF7-P53-/-细胞Nucleolin 蛋白表达的影响 | 第53-61页 |
| ·蛋白时程变化分析 | 第53-57页 |
| ·蛋白量效变化分析 | 第57-61页 |
| 4 Leptomycin B 出核抑制后的蛋白表达影响 | 第61-66页 |
| ·蛋白时程变化分析 | 第61-63页 |
| ·蛋白量效变化分析 | 第63-66页 |
| 5 电离辐射对Nucleolin 的DNA 结合活性的影响 | 第66-70页 |
| ·PCR 产物鉴定 | 第66-67页 |
| ·电离辐射对Nucleolin 的DNA 结合活性的时程影响 | 第67-68页 |
| ·电离辐射对Nucleolin 的DNA 结合活性的量效影响 | 第68-70页 |
| 第四章 讨论 | 第70-76页 |
| 1 电离辐射作用后Nucleolin 和P53 表达变化 | 第70-72页 |
| 2 P53 沉默后的Nucleolin 蛋白变化 | 第72-73页 |
| 3 Leptomycin B 作用后的Nucleolin 和P53 蛋白变化 | 第73-74页 |
| 4 P53 和Nucleolin 结合活性检测 | 第74-75页 |
| 5 研究展望 | 第75-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 中文摘要 | 第84-89页 |
| Abstract | 第89-95页 |
| 导师简介 | 第95-96页 |
| 个人简历及成果 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
