| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一部分:文献综述 胰岛素样生长因子1的研究进展 | 第12-27页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 胰岛素样生长因子 1 结构 | 第14-18页 |
| ·IGF-I 一级结构 | 第14-16页 |
| ·IGF-I 的空间结构 | 第16-17页 |
| ·二硫键与 IGF-I 折叠中间体 | 第17页 |
| ·IGF-I 的基因结构 | 第17-18页 |
| 2 IGF-I 的生物学功能 | 第18-20页 |
| ·Ins 样作用 | 第18-19页 |
| ·促进细胞生长增值 | 第19页 |
| ·促进胎儿的正常发育 | 第19页 |
| ·参与多种生理活动 | 第19-20页 |
| 3 IGF 受体 | 第20-22页 |
| ·IGF-I 与 IGF-IR | 第20-21页 |
| ·IGF-I 与 IGF-IIR | 第21页 |
| ·IGF-I 与胰岛素受体 | 第21-22页 |
| 4 IGFs 活性的调节因子-IGFBPs | 第22-24页 |
| ·IGF-I 与 IGFBPs 的结合 | 第22页 |
| ·IGFBPs 的功能 | 第22-24页 |
| 5 应用和展望 | 第24-27页 |
| ·治疗糖尿病 | 第24页 |
| ·治疗骨质疏松症 | 第24-25页 |
| ·促进损伤神经的康复 | 第25页 |
| ·疾病的诊断和治疗检测 | 第25页 |
| ·IGF-I 在其他方面的应用 | 第25-27页 |
| 第二部分:研究论文 | 第27-69页 |
| 一、人源性 IGF-I 表达载体转化烟草 | 第27-56页 |
| 摘要 | 第27-29页 |
| 引言 | 第29-30页 |
| 材料与方法 | 第30-46页 |
| 1 材料 | 第30-33页 |
| ·供试烟草 | 第30页 |
| ·菌株、质粒和主要生化试剂 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31-33页 |
| ·植物培养基 | 第32-33页 |
| ·细菌培养基 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-46页 |
| ·质粒的鉴定 | 第33-38页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第33-34页 |
| ·质粒转化大肠杆菌 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·质粒 p1301-35S-IGF-1-nos 的鉴定 | 第36-38页 |
| ·质粒转入农杆菌及鉴定 | 第38-39页 |
| ·根癌农杆菌感受态的制备 | 第38页 |
| ·根癌农杆菌转化 | 第38页 |
| ·根癌农杆菌转化子的鉴定 | 第38-39页 |
| ·烟草无菌苗的快繁 | 第39页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第39-40页 |
| ·农杆菌菌液的准备 | 第39-40页 |
| ·叶盘法转化 | 第40页 |
| ·筛选培养获得抗性幼苗 | 第40页 |
| ·转基因烟草植株的 GUS 鉴定及再生 | 第40-41页 |
| ·转基因烟草 GUS 活性组织化学分析 | 第40-41页 |
| ·GUS 阳性植株的再生 | 第41页 |
| ·生根培养 | 第41页 |
| ·炼苗与移栽 | 第41页 |
| ·转基因烟草植株总 DNA 的 PCR 鉴定 | 第41-43页 |
| ·CTAB 法抽提烟草植株叶片的总 DNA | 第41-42页 |
| ·转基因烟草植株的 PCR 鉴定 | 第42-43页 |
| ·转基因烟草的 RT-PCR 鉴定 | 第43-46页 |
| ·转基因烟草的总 RNA 提取 | 第43-44页 |
| ·Dnase 纯化处理总 RNA | 第44-45页 |
| ·RT-PCR | 第45-46页 |
| 结果与分析 | 第46-53页 |
| 1 质粒的 PCR 结果分析 | 第46页 |
| 2 质粒的酶切结果分析 | 第46-48页 |
| 3 转基因烟草的获得 | 第48-51页 |
| 4 转基因烟草的 PCR 分析 | 第51页 |
| 5 转基因烟草的 RT-PCR 分析 | 第51-53页 |
| 讨论 | 第53-56页 |
| 1 关于植物源 IGF-I 的应用 | 第53页 |
| 2 关于转化的效率 | 第53页 |
| 3 关于表达的鉴定 | 第53-54页 |
| 4 关于表达体系的完善 | 第54-56页 |
| ·启动子的选择与改造 | 第54页 |
| ·目的基因的改造与优化 | 第54-55页 |
| ·外源蛋白的定位与积累 | 第55-56页 |
| 二、适于植物表达的载体 p1301-35S-mIGF-1-nos 的构建 | 第56-69页 |
| 摘要 | 第56-58页 |
| 引言 | 第58页 |
| 材料与方法 | 第58-64页 |
| 1 材料 | 第58-60页 |
| ·菌株、质粒和主要生化试剂 | 第58-60页 |
| ·培养基 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-64页 |
| ·表达的载体 p1301-35S-mIGF-1-nos 的构建 | 第60-62页 |
| ·质粒 DNA 的制备 | 第60页 |
| ·质粒的酶切 | 第60页 |
| ·酶切产物的纯化与目的片段的回收 | 第60-61页 |
| ·DNA 片段的连接 | 第61-62页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第62页 |
| ·重组质粒(p1301-35S-mIGF-1-nos)的鉴定 | 第62-64页 |
| ·质粒 p1301-35S-mIGF-1-nos 的 PCR 鉴定 | 第62页 |
| ·质粒 p1301-35S-mIGF-1-nos 的酶切鉴定 | 第62-64页 |
| 结果分析 | 第64-68页 |
| 1 质粒 p1301-35S-mIGF-1-nos 的 PCR 分析 | 第64页 |
| 2 质粒 p1301-35S-IGF-1-nos 的酶切分析 | 第64-68页 |
| 讨论 | 第68-69页 |
| 1. 选择合适的启动子增强目的基因的表达 | 第68页 |
| 2 使用偏爱性的密码子提高表达水平 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 附录一 不同蛋白密码子偏爱性比较 | 第77-81页 |
| 附录二 中英文对照 | 第81-82页 |
| 研究生期间论文及研究成果 | 第82-84页 |
