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西瓜枯萎病R基因同源序列的克隆与分析

中文摘要第1-4页
Abstract第4-8页
缩略词第8-9页
引言第9-10页
1 国内外研究进展第10-29页
 1.1 西瓜枯萎病抗性研究进展第10-13页
  1.1.1 枯萎病菌生理小种的研究第10-11页
  1.1.2 抗性遗传研究第11-12页
  1.1.3 分子生物学研究进展第12-13页
 1.2 植物抗病分子机制第13-14页
 1.3 植物抗病基因研究进展第14-20页
  1.3.1 植物中已克隆的抗病基因第14-16页
  1.3.2 抗病基因的保守区第16-19页
   1.3.2.1 亮氨酸拉链(leucine zipper,LZ)第16-17页
   1.3.2.2 TIR区域第17页
   1.3.2.3 核苷酸结合位点(nucleotide binding site,NBS)第17-18页
   1.3.2.4 富含亮氮酸区域(leucine rich repeats,LRR)第18-19页
   1.3.2.5 丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶(PK)第19页
  1.3.3 抗病基因的分类第19-20页
 1.4 植物R基因同源序列研究进展第20-23页
  1.4.1 植物基因组中R基因及其同源序列的分布第20页
  1.4.2 R基因及其同源序列在基因组中的存在形式第20-21页
  1.4.3 R基因及其同源序列的演化第21-23页
  1.4.4 RGAs与R基因的关系第23页
 1.5 葫芦科作物RGAs进展第23-24页
 1.6 基于同源序列的候选基因法第24-29页
  1.6.6.1 同源序列候选基因法的原理第24页
  1.6.6.2 同源序列候选基因法的关键技术环节第24-25页
  1.6.6.3 同源序列候选基因法在分离植物基因中的应用第25-27页
  1.6.6.4 同源序列候选基因法的优越性第27页
  1.6.6.5 同源序列候选基因法的局限性第27-28页
  1.6.6.6 同源序列候选基因法的研究展望第28-29页
2 研究方案和技术路线第29-30页
 2.1 研究方案第29页
 2.2 研究内容第29页
 2.3 技术路线第29-30页
3 试验材料与方法第30-41页
 3.1 供试亲本和群体第30-31页
 3.2 西瓜RILs幼苗培养第31页
 3.3 西瓜枯萎病菌的培养和接种第31-32页
 3.4 病情鉴定和调查第32-33页
  3.4.1 病情分级标准第32-33页
  3.4.2 病情统计方法第33页
 3.5 基因组DNA的提取和纯度检测第33页
  3.5.1 提取方法第33页
  3.5.2 提取DNA的质量检测第33页
 3.6 RGA标记的筛选及目标片段的克隆第33-41页
  3.6.1 RGA引物的设计第33-37页
   3.6.1.1 其他植物抗枯萎病基因及其同源序列的检索第33-36页
   3.6.1.2 RGA简并引物的设计第36-37页
  3.6.2 RGA标记的筛选第37-39页
   3.6.2.1 RGA反应体系第37页
   3.6.2.2 RGA反应程序第37-38页
   3.6.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳第38页
   3.6.2.4 RILs群体RGA标记的分离检测第38页
   3.6.2.5 RILs群体RGA标记的数据收集与编码第38-39页
   3.6.2.6 连锁关系分析第39页
  3.6.3 目标片段的回收与连接第39页
   3.6.3.1 回收目标片段第39页
   3.6.3.2 目标片段与载体的连接第39页
  3.6.4 目标片段的克隆第39-41页
   3.6.4.1 重组质粒的转化第40页
   3.6.4.2 重组质粒的筛选第40页
   3.6.4.3 重组质粒DNA的提取第40页
   3.6.4.4 重组质粒的酶切检测第40页
   3.6.4.5 目标片段的测序第40-41页
4 结果与分析第41-60页
 4.1 枯萎病抗性的苗期鉴定第41页
 4.2 模板DNA的制备第41页
 4.3 RGA分析第41-60页
  4.3.1 RGA标记的筛选第41-44页
  4.3.2 同源序列的回收与克隆第44-46页
   4.3.2.1 同源序列的回收第44-45页
   4.3.2.2 重组质粒的筛选第45页
   4.3.2.3 重组质粒的酶切鉴定与测序第45-46页
  4.3.3 目标片段的碱基序列分析第46-50页
  4.3.4 目标片段编码的产物分析第50-53页
  4.3.5 目标片段的碱基序列同源性检索第53-55页
  4.3.6 目标片段编码的产物同源性检索第55-60页
5 讨论第60-65页
 5.1 枯萎病抗性鉴定的准确性与可靠性第60页
 5.2 RGA引物的简并性与特异性第60-61页
 5.3 同源序列分析法的优越性第61-62页
 5.4 RGA标记筛选的效率与的准确性第62-63页
 5.5 抗病基因同源序列的复杂性第63-64页
 5.6 进一步研究方向第64-65页
6 结论第65-66页
参考文献第66-72页
附录第72-77页
致谢第77页

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