中文摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-8页 |
缩略词 | 第8-9页 |
引言 | 第9-10页 |
1 国内外研究进展 | 第10-29页 |
1.1 西瓜枯萎病抗性研究进展 | 第10-13页 |
1.1.1 枯萎病菌生理小种的研究 | 第10-11页 |
1.1.2 抗性遗传研究 | 第11-12页 |
1.1.3 分子生物学研究进展 | 第12-13页 |
1.2 植物抗病分子机制 | 第13-14页 |
1.3 植物抗病基因研究进展 | 第14-20页 |
1.3.1 植物中已克隆的抗病基因 | 第14-16页 |
1.3.2 抗病基因的保守区 | 第16-19页 |
1.3.2.1 亮氨酸拉链(leucine zipper,LZ) | 第16-17页 |
1.3.2.2 TIR区域 | 第17页 |
1.3.2.3 核苷酸结合位点(nucleotide binding site,NBS) | 第17-18页 |
1.3.2.4 富含亮氮酸区域(leucine rich repeats,LRR) | 第18-19页 |
1.3.2.5 丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶(PK) | 第19页 |
1.3.3 抗病基因的分类 | 第19-20页 |
1.4 植物R基因同源序列研究进展 | 第20-23页 |
1.4.1 植物基因组中R基因及其同源序列的分布 | 第20页 |
1.4.2 R基因及其同源序列在基因组中的存在形式 | 第20-21页 |
1.4.3 R基因及其同源序列的演化 | 第21-23页 |
1.4.4 RGAs与R基因的关系 | 第23页 |
1.5 葫芦科作物RGAs进展 | 第23-24页 |
1.6 基于同源序列的候选基因法 | 第24-29页 |
1.6.6.1 同源序列候选基因法的原理 | 第24页 |
1.6.6.2 同源序列候选基因法的关键技术环节 | 第24-25页 |
1.6.6.3 同源序列候选基因法在分离植物基因中的应用 | 第25-27页 |
1.6.6.4 同源序列候选基因法的优越性 | 第27页 |
1.6.6.5 同源序列候选基因法的局限性 | 第27-28页 |
1.6.6.6 同源序列候选基因法的研究展望 | 第28-29页 |
2 研究方案和技术路线 | 第29-30页 |
2.1 研究方案 | 第29页 |
2.2 研究内容 | 第29页 |
2.3 技术路线 | 第29-30页 |
3 试验材料与方法 | 第30-41页 |
3.1 供试亲本和群体 | 第30-31页 |
3.2 西瓜RILs幼苗培养 | 第31页 |
3.3 西瓜枯萎病菌的培养和接种 | 第31-32页 |
3.4 病情鉴定和调查 | 第32-33页 |
3.4.1 病情分级标准 | 第32-33页 |
3.4.2 病情统计方法 | 第33页 |
3.5 基因组DNA的提取和纯度检测 | 第33页 |
3.5.1 提取方法 | 第33页 |
3.5.2 提取DNA的质量检测 | 第33页 |
3.6 RGA标记的筛选及目标片段的克隆 | 第33-41页 |
3.6.1 RGA引物的设计 | 第33-37页 |
3.6.1.1 其他植物抗枯萎病基因及其同源序列的检索 | 第33-36页 |
3.6.1.2 RGA简并引物的设计 | 第36-37页 |
3.6.2 RGA标记的筛选 | 第37-39页 |
3.6.2.1 RGA反应体系 | 第37页 |
3.6.2.2 RGA反应程序 | 第37-38页 |
3.6.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第38页 |
3.6.2.4 RILs群体RGA标记的分离检测 | 第38页 |
3.6.2.5 RILs群体RGA标记的数据收集与编码 | 第38-39页 |
3.6.2.6 连锁关系分析 | 第39页 |
3.6.3 目标片段的回收与连接 | 第39页 |
3.6.3.1 回收目标片段 | 第39页 |
3.6.3.2 目标片段与载体的连接 | 第39页 |
3.6.4 目标片段的克隆 | 第39-41页 |
3.6.4.1 重组质粒的转化 | 第40页 |
3.6.4.2 重组质粒的筛选 | 第40页 |
3.6.4.3 重组质粒DNA的提取 | 第40页 |
3.6.4.4 重组质粒的酶切检测 | 第40页 |
3.6.4.5 目标片段的测序 | 第40-41页 |
4 结果与分析 | 第41-60页 |
4.1 枯萎病抗性的苗期鉴定 | 第41页 |
4.2 模板DNA的制备 | 第41页 |
4.3 RGA分析 | 第41-60页 |
4.3.1 RGA标记的筛选 | 第41-44页 |
4.3.2 同源序列的回收与克隆 | 第44-46页 |
4.3.2.1 同源序列的回收 | 第44-45页 |
4.3.2.2 重组质粒的筛选 | 第45页 |
4.3.2.3 重组质粒的酶切鉴定与测序 | 第45-46页 |
4.3.3 目标片段的碱基序列分析 | 第46-50页 |
4.3.4 目标片段编码的产物分析 | 第50-53页 |
4.3.5 目标片段的碱基序列同源性检索 | 第53-55页 |
4.3.6 目标片段编码的产物同源性检索 | 第55-60页 |
5 讨论 | 第60-65页 |
5.1 枯萎病抗性鉴定的准确性与可靠性 | 第60页 |
5.2 RGA引物的简并性与特异性 | 第60-61页 |
5.3 同源序列分析法的优越性 | 第61-62页 |
5.4 RGA标记筛选的效率与的准确性 | 第62-63页 |
5.5 抗病基因同源序列的复杂性 | 第63-64页 |
5.6 进一步研究方向 | 第64-65页 |
6 结论 | 第65-66页 |
参考文献 | 第66-72页 |
附录 | 第72-77页 |
致谢 | 第77页 |