| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-18页 |
| 第一章 引言 | 第18-27页 |
| ·棉花抗逆基因工程育种研究 | 第18-20页 |
| ·棉花抗黄萎病基因工程 | 第18-19页 |
| ·棉花耐盐耐旱基因工程 | 第19-20页 |
| ·棉花耐盐基因工程 | 第19页 |
| ·棉花耐旱基因工程 | 第19-20页 |
| ·抗逆相关启动子 | 第20页 |
| ·ERF 转录因子与植物抗逆 | 第20-25页 |
| ·ERF 转录因子结构、分类和功能 | 第20-21页 |
| ·ERF 转录因子与信号转导途径 | 第21页 |
| ·ERF 逆境应答及在棉花中应用潜力分析 | 第21-25页 |
| ·ERF 在植物防卫应答中的作用 | 第21-22页 |
| ·ERF 在棉花黄萎病防卫应答中作用 | 第22-23页 |
| ·ERF 转录因子在非生物逆境应答中作用 | 第23-24页 |
| ·ERF 转录因子逆境应答机制 | 第24-25页 |
| ·研究目的及意义 | 第25-26页 |
| ·实验技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 海岛棉 GbEREB4 基因表达规律初探 | 第27-33页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·仪器及试剂 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-29页 |
| ·材料培育 | 第27-28页 |
| ·取材 | 第28页 |
| ·RNA 提取 | 第28-29页 |
| ·反转录 | 第29页 |
| ·实时荧光定量 | 第29页 |
| ·结果分析 | 第29-31页 |
| ·干旱处理用水培苗的获得 | 第29-30页 |
| ·RNA 提取质量分析 | 第30页 |
| ·cDNA 完整性分析 | 第30页 |
| ·荧光定量 PCR 分析 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 海 7124 中 GbEREB5 和 CCRI24 中同源基因启动子的克隆和分析 | 第33-47页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·菌株与载体 | 第33页 |
| ·仪器与试剂 | 第33-34页 |
| ·引物合成、测序 | 第34页 |
| ·LB 培养基的配制 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-39页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·材料基因组的提取 | 第34-35页 |
| ·启动子的克隆 | 第35-39页 |
| ·GbEREB5 基因及陆地棉中同源基因启动子序列的获得 | 第35-39页 |
| ·海 7124 和 CCRI24 中的 GbEREB5 基因启动子的分析比较 | 第39页 |
| ·结果分析 | 第39-46页 |
| ·棉花基因组 DNA 的提取 | 第39页 |
| ·启动子的克隆 | 第39-42页 |
| ·Tail-PCR 法扩增 Gb/GhEREB5 上游序列： | 第40-42页 |
| ·启动子的分析 | 第42-46页 |
| ·GbEREB5 启动子的生物信息学分析： | 第43-44页 |
| ·GhEREB5 启动子的生物信息学分析： | 第44页 |
| ·GbEREB5 与 GhEREB5 启动子序列差异比较： | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·海岛棉 7124 和陆地棉 CCRI24 中 EREB5 同源基因启动子的分析比较 | 第46页 |
| ·启动子分析预测软件的限制 | 第46-47页 |
| 第四章 海 7124 和 CCRI24 中 EREB6 基因启动子的克隆和序列分析 | 第47-58页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·植物材料 | 第47页 |
| ·菌株与载体 | 第47页 |
| ·仪器与试剂 | 第47页 |
| ·引物合成、测序 | 第47页 |
| ·LB 培养基的配制 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·植物材料 | 第48页 |
| ·材料基因组的提取 | 第48页 |
| ·GbEREB6 基因及陆地棉同源基因启动子的克隆 | 第48-51页 |
| ·启动子克隆 | 第48-51页 |
| ·海 7124 和 CCRI24EREB6 启动子的分析比较 | 第51页 |
| ·结果分析 | 第51-56页 |
| ·棉花基因组 DNA 的提取 | 第51页 |
| ·启动子的克隆 | 第51-53页 |
| ·Tail-PCR 法扩增 Gb/GhEREB6 上游序列 | 第51-53页 |
| ·启动子的分析 | 第53-56页 |
| ·GbEREB6 启动子的生物信息学分析 | 第54页 |
| ·GhEREB6 启动子的生物信息学分析 | 第54-55页 |
| ·GbEREB6 与 GhEREB6 启动子序列的差异比较 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 EREB6 启动子植物表达载体的构建和启动活性分析 | 第58-68页 |
| ·实验材料 | 第58-59页 |
| ·实验仪器及植物材料 | 第58页 |
| ·实验菌株及表达载体 | 第58页 |
| ·实验试剂 | 第58页 |
| ·合成测序 | 第58-59页 |
| ·植物培养基 | 第59页 |
| ·实验方法与步骤 | 第59-63页 |
| ·载体的构建 | 第59-60页 |
| ·基因枪轰击法转化洋葱表皮 | 第60-63页 |
| ·质粒大提 | 第60-61页 |
| ·GUS 染液的配置 | 第61-62页 |
| ·微弹的制备 | 第62页 |
| ·洋葱表皮的制备 | 第62页 |
| ·基因枪轰击 | 第62-63页 |
| ·基因枪轰击后洋葱表皮的培养 | 第63页 |
| ·染色后洋葱表皮在显微镜下观察 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-65页 |
| ·表达载体的构建 | 第63-65页 |
| ·pCBI 载体及启动子片段的验证 | 第63-64页 |
| ·pCBI 载体与启动子连接 | 第64-65页 |
| ·启动子启动活性验证 | 第65页 |
| ·讨论分析 | 第65-68页 |
| 第六章 GbEREB6 拟南芥转化及功能分析 | 第68-82页 |
| ·实验材料 | 第68-69页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·菌株及生化试剂 | 第68页 |
| ·试剂盒 | 第68页 |
| ·引物合成和测序 | 第68页 |
| ·培养基的配制 | 第68-69页 |
| ·逆境处理用试剂及溶液配制 | 第69页 |
| ·用到的仪器设备 | 第69页 |
| ·实验方法步骤 | 第69-74页 |
| ·过表达载体的构建 | 第69页 |
| ·过表达载体的农杆菌转化 | 第69-71页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第70页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第70-71页 |
| ·蘸花法转化拟南芥 | 第71-72页 |
| ·哥伦比亚野生型拟南芥的培育 | 第71页 |
| ·拟南芥花序浸染 | 第71-72页 |
| ·拟南芥阳性植株的筛选和鉴定 | 第72页 |
| ·拟南芥卡那抗性筛选及纯合株系获得 | 第72页 |
| ·转基因拟南芥的 GUS 组织染色 | 第72页 |
| ·拟南芥的 PCR 阳性鉴定 | 第72页 |
| ·拟南芥逆境处理 | 第72-73页 |
| ·拟南芥逆境生理指标测定 | 第73-74页 |
| ·游离脯氨酸含量的测定 | 第73页 |
| ·丙二醛及可溶性糖含量测定 | 第73-74页 |
| ·结果与分析 | 第74-81页 |
| ·转化用农杆菌阳性鉴定 | 第74页 |
| ·转基因拟南芥的 GUS 染色 | 第74-75页 |
| ·转基因拟南芥的分子检测 | 第75页 |
| ·拟南芥盐和 PEG 胁迫下表型观察 | 第75-76页 |
| ·高盐胁迫下拟南芥幼苗表型观察 | 第76页 |
| ·PEG 模拟干旱下拟南芥幼苗表型观察 | 第76页 |
| ·干旱和盐胁迫后拟南芥幼苗的脯氨酸含量测定 | 第76-78页 |
| ·干旱胁迫后拟南芥幼苗的丙二醛含量测定 | 第78页 |
| ·干旱胁迫后拟南芥幼苗的可溶性糖含量测定 | 第78-79页 |
| ·盐胁迫对拟南芥幼苗的影响 | 第79页 |
| ·盐胁迫下拟南芥幼苗的 DAB 染色 | 第79页 |
| ·盐胁迫对拟南芥幼苗根的影响 | 第79页 |
| ·自然干旱胁迫后叶绿素含量测定 | 第79-81页 |
| ·讨论 | 第81-82页 |
| 第七章 结论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 作者简历 | 第90页 |
