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β-1,4-半乳糖基转移酶的纯化及活性测定

摘要及关键词第1-7页
Abstract & Key Words第7-8页
综述部分 β-1,4-半乳糖基转移酶的研究进展第8-34页
 前言第9页
 一、基因家族第9-13页
  1.家族成员的分离与克隆第9-10页
  2.β4GTase Ⅰ的基因结构第10-11页
  3.人β4GTase家族成员的同源性比较第11页
  4.不同来源β4GTase的进化树比较第11-13页
 二、β4GTase高级结构第13-19页
  1.X-射线晶体分析第13-14页
  2.催化区域第14-16页
  3.底物结合区域第16页
  4.与蛋白相互作用之重要氨基酸第16-17页
  5.催化模型第17-18页
  6.α-乳蛋白的竞争结合第18-19页
 三、理化特征及表达分布第19-21页
  1.理化特征第19页
  2.细胞周期依赖性第19-20页
  3.糖基化与异质性第20页
  4.定位第20-21页
 四、生物学功能第21-27页
  1.受精过程第21-22页
  2.细胞的生长、粘附及迁移第22-25页
   2.1 胚胎早期发育第23页
   2.2 上皮细胞增殖第23-24页
   2.3 细胞信号传导第24页
   2.4 癌细胞的迁移第24-25页
  3.神经系统的发育第25-26页
   3.1 神经元细胞的迁移第25页
   3.2 胚胎神经系统的发育及损伤神经元的再生第25-26页
   3.3 对施旺氏细胞增殖的抑制第26页
  4.风湿性关节炎第26-27页
 结语第27-28页
 参考文献第28-34页
实验部分 β-1,4-半乳糖基转移酶的纯化与活性测定第34-69页
 前言第35-37页
 一、实验材料及仪器第37-42页
  1.菌种第37页
  2.质粒第37页
  3.酶及蛋白制剂第37页
  4.纯化树脂第37页
  5.试剂盒第37页
  6.主要试剂第37-38页
  7.溶液配制第38-40页
  8.电泳胶配制第40-41页
  9.主要仪器第41-42页
 二、实验方法第42-49页
  Part Ⅰ 菌种筛选第42-45页
   1.质粒DNA的制备与DNA酶切、PCR鉴定第42-44页
   2.大肠杆菌转化第44页
   3.诱导表达第44-45页
  Part Ⅱ 蛋白纯化第45-47页
   4.细胞抽提物的制备第45页
   5.融合蛋白的亲和纯化第45-46页
   6.凝血酶酶切第46页
   7.目的蛋白的纯化第46页
   8.谷胱甘肽Sepharose 4B的再生第46-47页
  Part Ⅲ 活性测定第47-49页
   9.光密度-H~+浓度标准曲线的绘制第47页
   10.酶活测定第47页
   11.反应因素的最优化第47-49页
   12.α-乳蛋白的特殊抑制第49页
 三、实验结果与分析第49-63页
  1.菌种筛选第49-52页
  2.蛋白纯化、鉴定第52-55页
  3.光密度-H~+浓度标准曲线的绘制第55-57页
  4.酶活测定第57-59页
  5.底物供体、受体的选择与配对第59页
  6.其他反应因素最优值的确定第59-62页
  7.α-乳蛋白的特殊抑制第62-63页
 四、讨论第63-66页
  1.β4GTase表达系统的选择第63-64页
  2.纯化策略的选择第64页
  3.与其他活性测定法的比较第64-65页
  4.疾病检测方面的应用第65-66页
 小结第66页
 参考文献第66-69页
附录一:实验部分英文缩写词表第69-70页
附录二:在校期间发表(录用)论文第70-71页
致谢第71页

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