摘要及关键词 | 第1-7页 |
Abstract & Key Words | 第7-8页 |
综述部分 β-1,4-半乳糖基转移酶的研究进展 | 第8-34页 |
前言 | 第9页 |
一、基因家族 | 第9-13页 |
1.家族成员的分离与克隆 | 第9-10页 |
2.β4GTase Ⅰ的基因结构 | 第10-11页 |
3.人β4GTase家族成员的同源性比较 | 第11页 |
4.不同来源β4GTase的进化树比较 | 第11-13页 |
二、β4GTase高级结构 | 第13-19页 |
1.X-射线晶体分析 | 第13-14页 |
2.催化区域 | 第14-16页 |
3.底物结合区域 | 第16页 |
4.与蛋白相互作用之重要氨基酸 | 第16-17页 |
5.催化模型 | 第17-18页 |
6.α-乳蛋白的竞争结合 | 第18-19页 |
三、理化特征及表达分布 | 第19-21页 |
1.理化特征 | 第19页 |
2.细胞周期依赖性 | 第19-20页 |
3.糖基化与异质性 | 第20页 |
4.定位 | 第20-21页 |
四、生物学功能 | 第21-27页 |
1.受精过程 | 第21-22页 |
2.细胞的生长、粘附及迁移 | 第22-25页 |
2.1 胚胎早期发育 | 第23页 |
2.2 上皮细胞增殖 | 第23-24页 |
2.3 细胞信号传导 | 第24页 |
2.4 癌细胞的迁移 | 第24-25页 |
3.神经系统的发育 | 第25-26页 |
3.1 神经元细胞的迁移 | 第25页 |
3.2 胚胎神经系统的发育及损伤神经元的再生 | 第25-26页 |
3.3 对施旺氏细胞增殖的抑制 | 第26页 |
4.风湿性关节炎 | 第26-27页 |
结语 | 第27-28页 |
参考文献 | 第28-34页 |
实验部分 β-1,4-半乳糖基转移酶的纯化与活性测定 | 第34-69页 |
前言 | 第35-37页 |
一、实验材料及仪器 | 第37-42页 |
1.菌种 | 第37页 |
2.质粒 | 第37页 |
3.酶及蛋白制剂 | 第37页 |
4.纯化树脂 | 第37页 |
5.试剂盒 | 第37页 |
6.主要试剂 | 第37-38页 |
7.溶液配制 | 第38-40页 |
8.电泳胶配制 | 第40-41页 |
9.主要仪器 | 第41-42页 |
二、实验方法 | 第42-49页 |
Part Ⅰ 菌种筛选 | 第42-45页 |
1.质粒DNA的制备与DNA酶切、PCR鉴定 | 第42-44页 |
2.大肠杆菌转化 | 第44页 |
3.诱导表达 | 第44-45页 |
Part Ⅱ 蛋白纯化 | 第45-47页 |
4.细胞抽提物的制备 | 第45页 |
5.融合蛋白的亲和纯化 | 第45-46页 |
6.凝血酶酶切 | 第46页 |
7.目的蛋白的纯化 | 第46页 |
8.谷胱甘肽Sepharose 4B的再生 | 第46-47页 |
Part Ⅲ 活性测定 | 第47-49页 |
9.光密度-H~+浓度标准曲线的绘制 | 第47页 |
10.酶活测定 | 第47页 |
11.反应因素的最优化 | 第47-49页 |
12.α-乳蛋白的特殊抑制 | 第49页 |
三、实验结果与分析 | 第49-63页 |
1.菌种筛选 | 第49-52页 |
2.蛋白纯化、鉴定 | 第52-55页 |
3.光密度-H~+浓度标准曲线的绘制 | 第55-57页 |
4.酶活测定 | 第57-59页 |
5.底物供体、受体的选择与配对 | 第59页 |
6.其他反应因素最优值的确定 | 第59-62页 |
7.α-乳蛋白的特殊抑制 | 第62-63页 |
四、讨论 | 第63-66页 |
1.β4GTase表达系统的选择 | 第63-64页 |
2.纯化策略的选择 | 第64页 |
3.与其他活性测定法的比较 | 第64-65页 |
4.疾病检测方面的应用 | 第65-66页 |
小结 | 第66页 |
参考文献 | 第66-69页 |
附录一:实验部分英文缩写词表 | 第69-70页 |
附录二:在校期间发表(录用)论文 | 第70-71页 |
致谢 | 第71页 |