| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-14页 |
| 缩略词列表 | 第14-17页 |
| 1 绪论 | 第17-32页 |
| ·研究意义与背景 | 第17页 |
| ·MGF 研究现状 | 第17-26页 |
| ·Igf-1 基因结构与表达特点 | 第17-21页 |
| ·MGF 产生机制 | 第21-22页 |
| ·MGF 的功能 | 第22-25页 |
| ·MGF 可能的结构和理化性质 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的和研究内容 | 第26-32页 |
| ·本研究的目的 | 第26-27页 |
| ·本研究的主要内容 | 第27-32页 |
| 2 MGF 及其E 肽原核表达系统的构建 | 第32-44页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·材料与方法 | 第32-38页 |
| ·材料 | 第32-35页 |
| ·方法 | 第35-38页 |
| ·结果 | 第38-41页 |
| ·PCR 扩增des(1-3)MGF 和MGF-Ct24E 基因片段 | 第38页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 3 重组蛋白的发酵表达及纯化鉴定 | 第44-60页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·材料和方法 | 第44-48页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-48页 |
| ·结果 | 第48-56页 |
| ·发酵表达 | 第48-49页 |
| ·包含体的洗涤 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白柱层析纯化 | 第50-51页 |
| ·酶切，精纯化及鉴定 | 第51-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·本章小结 | 第58-60页 |
| 4 多克隆抗体的制备及MGF 在成骨细胞中的表达分析 | 第60-71页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·材料和方法 | 第60-64页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·方法 | 第61-64页 |
| ·结果 | 第64-68页 |
| ·抗体制备 | 第64页 |
| ·抗体专一性鉴定 | 第64-65页 |
| ·拉伸刺激后成骨细胞中MGF 蛋白水平的变化 | 第65-67页 |
| ·MGF 在细胞内的定位分析 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 5 Ad/MGF、Ad/IGF-1 的构建及细胞感染 | 第71-86页 |
| ·引言 | 第71页 |
| ·材料与方法 | 第71-79页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·方法 | 第72-79页 |
| ·结果 | 第79-84页 |
| ·pAdTrac-MGF、pAdTrac-IGF-1 的构建 | 第79-80页 |
| ·pAdEasy-MGF、pAdEasy-IGF-1 的构建 | 第80-81页 |
| ·重组腺病毒包装、鉴定和滴度测定 | 第81-82页 |
| ·重组腺病毒感染MC3T3-E1 和MGF、IGF-1 表达鉴定 | 第82-84页 |
| ·讨论 | 第84-85页 |
| ·本章小结 | 第85-86页 |
| 6 MGF 及其E 肽对MC3T3-E1 增殖、迁移的影响 | 第86-103页 |
| ·引言 | 第86页 |
| ·材料和方法 | 第86-89页 |
| ·材料 | 第86-87页 |
| ·方法 | 第87-89页 |
| ·结果 | 第89-98页 |
| ·MTT 法测细胞增殖 | 第89-91页 |
| ·细胞周期分析 | 第91-92页 |
| ·细胞迁移分析 | 第92-94页 |
| ·MGF 及其E 肽对Erk1/2、Akt 活化磷酸化的影响 | 第94-95页 |
| ·抑制Erk1/2、Akt 活化对多肽功能的影响 | 第95-98页 |
| ·讨论 | 第98-101页 |
| ·本章小结 | 第101-103页 |
| 7 MGF 及其E 肽对MC3T3-E1 分化矿化的影响 | 第103-121页 |
| ·引言 | 第103页 |
| ·材料和方法 | 第103-107页 |
| ·材料 | 第103-104页 |
| ·方法 | 第104-107页 |
| ·结果 | 第107-116页 |
| ·ALP 活性分析 | 第107-109页 |
| ·基质蛋白 Col1、OPN 及转录因子 Cbfα-1 的表达 | 第109-113页 |
| ·矿化染色和钙沉淀定量分析 | 第113-116页 |
| ·讨论 | 第116-119页 |
| ·本章小结 | 第119-121页 |
| 8 结论与展望 | 第121-124页 |
| ·主要结论 | 第121-122页 |
| ·课题创新性 | 第122-123页 |
| ·未来工作展望 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-138页 |
| 附录1 MGF 的氨基酸组成 | 第138-139页 |
| 附录2 pMGF 测序结果 | 第139-140页 |
| 附录3 溶液配制 | 第140-148页 |
| 附录4 论文工作 | 第148-150页 |
