| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-18页 |
| 1 绪论 | 第18-43页 |
| ·研究意义与背景 | 第18-19页 |
| ·SDF-1 及其受体CXCR4 的研究现状 | 第19-22页 |
| ·CXCR4 的构效关系 | 第19-20页 |
| ·SDF-1 的构效关系 | 第20-21页 |
| ·SDF-1/CXCR4 的相互作用 | 第21-22页 |
| ·SDF-1/CXCR4 与肿瘤的相互关系 | 第22-27页 |
| ·SDF-1/CXCR4 相互作用与肿瘤的生长 | 第22-23页 |
| ·SDF-1/CXCR4 调控免疫细胞对肿瘤的浸润及肿瘤免疫耐受 | 第23-24页 |
| ·CXCR4/SDF-1 相互作用促进肿瘤细胞转移 | 第24-26页 |
| ·SDF-1/CXCR4 对肿瘤细胞的诱导粘附与促分泌作用 | 第26-27页 |
| ·CXCR4 与肿瘤的预后 | 第27页 |
| ·以CXCR4/SDF-1 为靶点的肿瘤转移治疗 | 第27-28页 |
| ·基于胞内抗体/胞内因子的表型敲除技术 | 第28-31页 |
| ·胞内抗体/胞内因子表型敲除技术在医学领域中的应用 | 第31-34页 |
| ·胞内抗体/胞内因子技术在AIDS 防治中的应用 | 第31-32页 |
| ·胞内抗体/胞内因子技术在肿瘤防治中的应用 | 第32-33页 |
| ·胞内抗体/胞内因子技术在其它疾病治疗中的应用 | 第33-34页 |
| ·本课题组在胞内因子研究方面的工作基础及遇到的问题 | 第34页 |
| ·穿膜肽是一种高效低毒的蛋白运载工具 | 第34-38页 |
| ·穿膜肽的发现与研究意义 | 第34-35页 |
| ·穿膜肽的结构及分类 | 第35-36页 |
| ·穿膜肽的跨膜机制 | 第36-38页 |
| ·项目提出 | 第38-39页 |
| ·研究目标、研究内容与实施方案 | 第39-43页 |
| ·研究目标 | 第39页 |
| ·研究内容 | 第39-40页 |
| ·实施方案 | 第40-43页 |
| 2 TAT/54R/KDEL 的构建、表达与纯化复性 | 第43-60页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·材料和方法 | 第43-53页 |
| ·材料 | 第43-48页 |
| ·方法 | 第48-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-59页 |
| ·GFP/KDEL 和54R/KDEL 基因的扩增 | 第53-54页 |
| ·重组质粒TAT/GFP/KDEL/pTAT-HA 和 TAT/54R/KDEL /pTAT-HA 的鉴定 | 第54-55页 |
| ·TAT/GFP/KDEL 和TAT/54R/KDEL 在BL21(DE3)中的表达 | 第55-56页 |
| ·TAT/GFP/KDEL 和TAT/54R/KDEL 的Western blot 验证 | 第56-57页 |
| ·TAT/GFP/KDEL 和TAT/54R/KDEL 的亲和层析与HPLC 纯化 | 第57-58页 |
| ·TAT/GFP/KDEL 的脱盐浓缩和TAT/54R/KDEL 的复性 | 第58-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 3 TAT/54R/KDEL 的体外活性研究 | 第60-76页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·材料与方法 | 第60-65页 |
| ·材料 | 第60-62页 |
| ·方法 | 第62-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-75页 |
| ·浓度和时间对嵌合蛋白TAT/GFP/KDEL 穿膜效率的影响 | 第65-67页 |
| ·嵌合蛋白TAT/54R/KDEL 对 MOLT-4 和 CNE2 细胞的穿膜效率和靶向性分析 | 第67-69页 |
| ·嵌合蛋白TAT/GFP/KDEL 和TAT/54RKDEL 的内质网定位状况 | 第69-70页 |
| ·TAT/54R/KDEL 的细胞毒性和对细胞增殖的影响 | 第70-71页 |
| ·流式细胞术检测TAT/54R/KDEL 的CXCR4 表型敲除能力 | 第71-73页 |
| ·趋化实验检测TAT/54R/KDEL 对 SDF-1 诱导的 MOLT-4 细胞迁移的抑制效应 | 第73页 |
| ·Western blot 法检测TAT/54R/KDEL 对 SDF-1 诱导的 ERK 激活的抑制效应 | 第73-75页 |
| ·本章小结 | 第75-76页 |
| 4 TAT/54R/KDEL 的体内活性研究 | 第76-85页 |
| ·引言 | 第76页 |
| ·材料与方法 | 第76-80页 |
| ·主要材料 | 第76-77页 |
| ·方法 | 第77-80页 |
| ·结果 | 第80-84页 |
| ·TAT/54R/KDEL 对乳腺癌细胞4T1 生长的抑制作用 | 第80-81页 |
| ·TAT/54R/KDEL 对乳腺癌细胞4T1 转移的抑制作用 | 第81页 |
| ·RT-PCR 检测肿瘤原发灶及转移灶CXCR4 和SDF-1 的表达 | 第81-82页 |
| ·流式细胞术检测TAT/54R/KDEL 对肿瘤组织细胞 CXCR4 的表型敲除作用 | 第82-83页 |
| ·TAT/54R/KDEL 对荷瘤小鼠生存期的影响 | 第83-84页 |
| ·本章小结 | 第84-85页 |
| 5 讨论 | 第85-99页 |
| ·一种新的TAT 介导的胞内因子表型敲除技术 | 第85-86页 |
| ·TAT/54R/KDEL 原核表达系统的建立是实现表型敲除的基础 | 第86-87页 |
| ·基因构建 | 第86页 |
| ·嵌合蛋白TAT/54R/KDEL 的纯化和复性 | 第86-87页 |
| ·嵌合蛋白TAT/54R/KDEL 的稳定性 | 第87页 |
| ·利用TAT/GFP/KDEL 考察实验方案的可行性 | 第87-88页 |
| ·TAT/54R/KDEL 的穿膜效率及靶向性 | 第88-90页 |
| ·TAT/54RKDEL 的内质网定位状况 | 第90页 |
| ·TAT/54R/KDEL 的细胞毒性和对细胞增殖的影响 | 第90-91页 |
| ·TAT/54R/KDEL 细胞水平的CXCR4 表型敲除活性 | 第91-92页 |
| ·乳腺癌动物模型的构建及TAT/54R/KDEL 对乳腺癌转移的抑制作用 | 第92-93页 |
| ·嵌合蛋白TAT/54R/KDEL 的潜在用途 | 第93-99页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第93-95页 |
| ·抑制HIV 的感染 | 第95-98页 |
| ·TAT/54R/KDEL 在抗风湿性关节炎中的应用价值 | 第98-99页 |
| 6 结论、创新性与展望 | 第99-101页 |
| ·结论 | 第99页 |
| ·创新性 | 第99页 |
| ·展望 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-115页 |
| 附录 | 第115-120页 |
