| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| ·长链酰基辅酶A合成酶(LACS) | 第13-14页 |
| ·长链酰基辅酶A参与的反应 | 第14-19页 |
| ·油脂的合成 | 第15-17页 |
| ·脂肪酸的β-氧化 | 第17-19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19页 |
| ·主要研究内容和技术路线 | 第19-22页 |
| ·主要研究内容 | 第19-21页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 油菜LACS1基因的克隆鉴定及生物信息学分析 | 第22-34页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·植物材料和菌种 | 第22页 |
| ·酶和试剂 | 第22-23页 |
| ·基本溶液的配制 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·引物设计与合成 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-29页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·除去RNA中的基因组DNA | 第25页 |
| ·反转录 | 第25-26页 |
| ·3'RACE | 第26-27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·大肠杆菌热击感受态的制备 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的热击转化 | 第27-28页 |
| ·SDS-碱裂解法小量抽提质粒DNA | 第28页 |
| ·生物信息学分析 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-32页 |
| ·BnLACS1基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·生物信息学分析 | 第30-32页 |
| ·分子进化分析 | 第32页 |
| ·讨论与小结 | 第32-34页 |
| 第三章 油菜LACS1的功能鉴定与表达分析 | 第34-45页 |
| ·材料和试剂 | 第34-36页 |
| ·植物材料和菌种 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·基本溶液 | 第35页 |
| ·酵母培养基 | 第35-36页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-39页 |
| ·酵母表达载体pYES2-BnLACS1的构建 | 第36-37页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·重组质粒转化酵母感受态细胞 | 第37-38页 |
| ·互补缺陷型酵母YB525 | 第38页 |
| ·RT-PCR | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-43页 |
| ·重组质粒pYES2-BnLACS1的鉴定 | 第39-40页 |
| ·BnLACS1的功能鉴定 | 第40-41页 |
| ·BnLACS1的底物偏好性分析 | 第41-42页 |
| ·BnLACS1在萌发期和成熟组织中的表达分析 | 第42页 |
| ·BnLACS1在不同含油量种子中的表达分析 | 第42-43页 |
| ·讨论与小结 | 第43-45页 |
| 第四章 油菜LACS1基因植物表达载体的构建 | 第45-53页 |
| ·材料和试剂 | 第45-46页 |
| ·植物材料、菌种和试剂 | 第45-46页 |
| ·基本缓冲液 | 第46页 |
| ·引物设计与合成 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-50页 |
| ·Napin启动子的获得 | 第46-47页 |
| ·双元表达载体pCAMBIA2200-Napin的构建 | 第47页 |
| ·表达载体pCAMBIA2200-Napin-BnLACS1的构建 | 第47-49页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·冻融法转化农杆菌感受态细胞 | 第49页 |
| ·阳性克隆的鉴定和保存 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-52页 |
| ·重组质粒pCAMBIA2200-Napin的鉴定 | 第50-51页 |
| ·表达载体pCAMBIA2200-Napin-BnLACS1的鉴定 | 第51页 |
| ·重组质粒转化农杆菌的鉴定 | 第51-52页 |
| ·讨论与小结 | 第52-53页 |
| 第五章 油菜LACS4基因的电子克隆和分析 | 第53-61页 |
| ·材料和方法 | 第53-54页 |
| ·植物材料 | 第53页 |
| ·酶和试剂 | 第53页 |
| ·方法 | 第53页 |
| ·生物信息学分析 | 第53-54页 |
| ·引物设计与合成 | 第54页 |
| ·RT-PCR | 第54页 |
| ·结果和分析 | 第54-59页 |
| ·BnLACS4的EST分析 | 第54页 |
| ·BnLACS4的电子克隆 | 第54-56页 |
| ·BnLACS4 cDNA的序列分析 | 第56-57页 |
| ·分子进化分析 | 第57-58页 |
| ·BnLACS4的表达分析 | 第58-59页 |
| ·讨论与小结 | 第59-61页 |
| 第六章 总结与展望 | 第61-63页 |
| ·主要工作总结 | 第61页 |
| ·工作展望 | 第61-63页 |
| 参考文献(References) | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 在学期间发表论文 | 第72-73页 |
| 参加课题 | 第73页 |
