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冰岛硫化叶菌反螺旋酶基因遗传学分析

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
1 前言第10-23页
   ·古菌概述第10-12页
   ·嗜热古菌第12-14页
   ·拓扑异构酶第14-15页
   ·反螺旋酶第15-20页
   ·硫化叶菌第20-21页
   ·研究目的与内容第21-23页
2 常规整合-分离法敲除RG基因第23-42页
   ·实验材料第23-25页
     ·菌种和质粒第23页
     ·主要药品第23-24页
     ·培养基及组分第24-25页
     ·主要试剂第25页
     ·实验仪器第25页
   ·实验方法第25-33页
     ·重组质粒pRG的构建第25-30页
     ·硫化叶菌感受态细胞的制备与转化第30-31页
     ·硫化叶菌转化子的验证第31页
     ·转化子氨苄青霉素基因的扩增第31-32页
     ·转化子回复频率的计算第32页
     ·PCR验证回复突变第32-33页
   ·结果与分析第33-40页
     ·PCR扩增左臂基因和右臂基因第33-34页
     ·PCR扩增pyrEF基因第34页
     ·重组质粒pUC-L arm-pyrEF的酶切鉴定第34页
     ·重组质粒pRG的构建第34-35页
     ·S.islandicus E233转化子验证第35-37页
     ·转化子单交换的验证第37-38页
     ·单交换转化子回复突变频率第38-39页
     ·PCR验证回复突变第39-40页
   ·讨论第40-42页
3 双交换和"环出"法敲除RG基因第42-53页
   ·实验材料第42-43页
     ·菌种和质粒第42-43页
     ·主要药品第43页
     ·培养基及组分第43页
     ·主要试剂第43页
     ·实验仪器第43页
   ·实验方法第43-47页
     ·重组质粒pRG pop in-pop out的构建与转化第43-45页
     ·重组质粒的转化及转化子的筛选第45页
     ·重组质粒整合方式鉴定第45-47页
   ·结果与分析第47-51页
     ·R′arm基因的扩增第47页
     ·重组质粒pRG pop in-pop out酶切验证第47-48页
     ·转化子PCR验证第48-49页
     ·反向PCR及测序第49-51页
   ·讨论第51-53页
4 结论第53-55页
参考文献第55-61页
附录第61-65页
致谢第65页

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