| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 第一章 综述 | 第17-31页 |
| ·引言 | 第17-18页 |
| ·IBD | 第18-20页 |
| ·IBD 的发展历史 | 第18页 |
| ·IBD 的流行病学 | 第18-19页 |
| ·IBD 的发病机理 | 第19页 |
| ·IBD 的临床症状和病理变化 | 第19-20页 |
| ·IBDV | 第20-23页 |
| ·IBDV 形态结构 | 第20页 |
| ·IBDV 基因组 | 第20页 |
| ·IBDV 蛋白功能 | 第20-23页 |
| ·IBDV 感染的分子基础 | 第23-26页 |
| ·IBDV 复制 | 第23-24页 |
| ·IBDV 抗原变异的分子基础 | 第24-25页 |
| ·IBDV 毒力和细胞嗜性 | 第25-26页 |
| ·诊断 | 第26页 |
| ·预防控制 | 第26-28页 |
| ·干扰素抗病毒机制 | 第28-30页 |
| ·IFN 的合成与信号转导路径 | 第28-29页 |
| ·IFN 抗病毒机制 | 第29页 |
| ·病毒逃避IFN 系统的机制 | 第29-30页 |
| ·研究目的和意义 | 第30-31页 |
| 第二章 VP5 缺失株的构建及生物学特性分析 | 第31-47页 |
| ·材料与方法 | 第31-37页 |
| ·质粒、病毒、细胞与抗体 | 第31页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第31页 |
| ·主要器材 | 第31-32页 |
| ·引物设计与合成 | 第32页 |
| ·突变位点引入 | 第32-33页 |
| ·核酶结构引入 | 第33页 |
| ·基因组A 节段感染性克隆的构建 | 第33-34页 |
| ·拯救病毒 | 第34页 |
| ·拯救病毒的IFA 鉴定 | 第34页 |
| ·拯救病毒的RT-PCR 检测 | 第34-35页 |
| ·IBDV 基因组RNA 的提取 | 第34-35页 |
| ·IBDV 基因组RNA 的RT-PCR | 第35页 |
| ·复制动力学曲线绘制 | 第35页 |
| ·MTT 法测定细胞活力 | 第35-36页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第36页 |
| ·Western blot 检测 | 第36页 |
| ·动物实验 | 第36页 |
| ·法氏囊病理组织损伤检测 | 第36页 |
| ·AIV-HI 抗体检测 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-44页 |
| ·突变位点的引入 | 第37页 |
| ·感染性分子克隆的构建 | 第37-38页 |
| ·病毒拯救 | 第38页 |
| ·拯救病毒IFA 分析 | 第38-39页 |
| ·拯救病毒RT-PCR 及序列分析 | 第39页 |
| ·rGt△VP5 体内外生物学特性分析 | 第39-41页 |
| ·rGt△VP5 复制动力学分析 | 第39-40页 |
| ·rGt△VP5 感染细胞活力分析 | 第40页 |
| ·rGt△VP5 诱导细胞凋亡分析 | 第40-41页 |
| ·rGx-F9VP2△VP5 体内外生物学特性分析 | 第41-44页 |
| ·rGx-F9VP2△VP5 复制动力学分析 | 第41页 |
| ·rGx-F9VP2△VP 感染细胞活力分析 | 第41-42页 |
| ·rGx-F9VP2△VP 诱导细胞凋亡分析 | 第42-43页 |
| ·法氏囊的病理组织损伤分析 | 第43-44页 |
| ·rGx-F9VP2△VP5 感染对SPF 鸡AIV-HI 抗体干扰分析 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| 第三章 强弱毒 VP5 功能差异的比较 | 第47-58页 |
| ·材料与方法 | 第47-51页 |
| ·质粒、病毒、细胞和抗体 | 第47页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47-48页 |
| ·引物设计与合成 | 第48页 |
| ·融合PCR 获得A 节段嵌合基因组 | 第48-49页 |
| ·IBDV 基因组A 节段感染性克隆的构建 | 第49-50页 |
| ·拯救病毒 | 第50页 |
| ·拯救嵌合病毒的IFA 鉴定 | 第50页 |
| ·拯救嵌合病毒的RT-PCR 检测 | 第50页 |
| ·复制动力学曲线绘制 | 第50页 |
| ·MTT 法测定细胞活力检测 | 第50页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第50-51页 |
| ·Western blot 检测 | 第51页 |
| ·动物实验 | 第51页 |
| ·法氏囊病理组织损伤检测 | 第51页 |
| ·IBDV 抗体检测 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-57页 |
| ·基因组A 节段的融合 | 第51-52页 |
| ·感染性分子克隆的构建 | 第52-53页 |
| ·病毒拯救 | 第53页 |
| ·拯救嵌合病毒的IFA 和RT-PCR 分析 | 第53页 |
| ·rGtGxVP5 体外生物学特性分析 | 第53-55页 |
| ·rGtGxVP5 复制动力学分析 | 第53页 |
| ·rGtGxVP5 感染细胞活力分析 | 第53-54页 |
| ·rGtGxVP5 诱导细胞凋亡分析 | 第54-55页 |
| ·rGxGtVP5 体内生物学特性分析 | 第55-57页 |
| ·rGxGtVP5 感染SPF 鸡IBDV 抗体分析 | 第55页 |
| ·法氏囊的病理组织损伤分析 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第四章 VP5 复制功能区的确定 | 第58-67页 |
| ·材料与方法 | 第58-61页 |
| ·质粒、病毒、细胞与抗体 | 第58页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第58页 |
| ·主要仪器 | 第58-59页 |
| ·引物设计与合成 | 第59页 |
| ·突变位点引入 | 第59-60页 |
| ·核酶结构引入 | 第60页 |
| ·基因组A 节段感染性克隆的构建 | 第60页 |
| ·拯救病毒 | 第60-61页 |
| ·拯救病毒的IFA 鉴定 | 第61页 |
| ·拯救病毒的RT-PCR 检测 | 第61页 |
| ·复制动力学曲线绘制 | 第61页 |
| ·MTT 法测定细胞活力检测 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-65页 |
| ·突变位点的引入 | 第61-62页 |
| ·感染性分子克隆的构建 | 第62-63页 |
| ·病毒拯救 | 第63页 |
| ·拯救病毒的IFA 和RT-PCR 分析 | 第63-64页 |
| ·病毒复制动力学分析 | 第64页 |
| ·病毒感染细胞活力分析 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 VP5 分子致病机制研究 | 第67-74页 |
| ·材料与方法 | 第67-68页 |
| ·质粒、病毒与细胞 | 第67页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第67页 |
| ·主要仪器 | 第67-68页 |
| ·引物设计与合成 | 第68页 |
| ·真核表达载体的构建和鉴定 | 第68页 |
| ·干扰素生成的生物学检测 | 第68页 |
| ·VP5 蛋白抑制干扰素生成的报告基因表达检测 | 第68页 |
| ·结果 | 第68-72页 |
| ·真核表达载体的构建和鉴定 | 第68-69页 |
| ·干扰素生成的生物学检测 | 第69-70页 |
| ·VP5 蛋白抑制干扰素生成的报告基因表达分析 | 第70-72页 |
| ·VP5 蛋白抑制干扰素诱导Mx 蛋白表达的分析 | 第70-71页 |
| ·VP5 蛋白抑制干扰素生成途径的ISRE 转录因子激活的分析 | 第71页 |
| ·VP5 蛋白抑制干扰素生成途径的NF-κB 因子激活的分析 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-74页 |
| 第六章 基于 VP5 基因标记疫苗初步探讨 | 第74-87页 |
| ·材料与方法 | 第74-79页 |
| ·质粒、病毒与细胞 | 第74页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第74-75页 |
| ·主要仪器 | 第75页 |
| ·引物设计与合成 | 第75页 |
| ·表达23/82VP5 蛋白原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达、纯化 | 第75-76页 |
| ·动物免疫及细胞融合和单克隆阳性细胞株的筛选 | 第76页 |
| ·融合PCR 获得A 节段嵌合基因组 | 第76-77页 |
| ·基因组A 节段感染性克隆的构建 | 第77页 |
| ·拯救病毒 | 第77页 |
| ·拯救嵌合病毒的IFA 鉴定 | 第77页 |
| ·拯救嵌合病毒的RT-PCR 检测 | 第77页 |
| ·复制动力学曲线绘制 | 第77-78页 |
| ·MTT 法测定细胞活力检测 | 第78页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第78页 |
| ·Western Blot 检测 | 第78页 |
| ·动物实验 | 第78页 |
| ·IBDV 抗体检测 | 第78-79页 |
| ·结果 | 第79-84页 |
| ·表达23/82VP5 蛋白原核表达质粒鉴定 | 第79页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第79页 |
| ·单克隆杂交瘤细胞株的建立及反应性分析 | 第79-80页 |
| ·基因组A 节段的融合 | 第80页 |
| ·感染性分子克隆的构建 | 第80页 |
| ·病毒拯救 | 第80-81页 |
| ·拯救嵌合病毒的IFA 和RT-PCR 分析 | 第81页 |
| ·rGt2382VP5 复制动力学分析 | 第81-82页 |
| ·rGt2382VP5 感染细胞活力分析 | 第82-83页 |
| ·rGt2382VP5 感染细胞凋亡分析 | 第83页 |
| ·rGx-F9VP2△VP5 感染SPF 鸡IBDV 抗体分析 | 第83-84页 |
| ·rGx-F9VP2△VP5 的免疫效力评价 | 第84页 |
| ·讨论 | 第84-87页 |
| 第七章 结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 作者简历 | 第101页 |
