| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1.文献综述 | 第10-24页 |
| ·关于苏云金芽孢杆菌的概述 | 第10-19页 |
| ·苏云金芽孢杆菌研究历史 | 第10-11页 |
| ·苏云金芽孢杆菌毒素 | 第11页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白的种类及其基因分类 | 第11-14页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白的结构与功能 | 第14-16页 |
| ·杀虫蛋白的作用机理与模型 | 第16-17页 |
| ·昆虫对杀虫晶体蛋白的抗性及治理 | 第17-19页 |
| ·关于葡聚糖酶基因的的概述 | 第19-22页 |
| ·β-葡聚糖酶的来源及分类 | 第20-21页 |
| ·β-葡聚糖酶的结构特点及作用机理 | 第21页 |
| ·β-葡聚糖酶在植物抗病基因工程中的应用 | 第21-22页 |
| ·本研究立题依据和意义 | 第22-23页 |
| ·本研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-39页 |
| ·试验材料 | 第24-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·常用培养基 | 第24页 |
| ·酶、试剂和主要缓冲液 | 第24-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·试验方法 | 第27-39页 |
| ·生物信息学分cry1Ac、cmg1的cDNA序列的密码子组成 | 第27页 |
| ·构建原核表达载体pET-22b-Ac | 第27-31页 |
| ·构建原核表达载体pET-22b-cmg1 | 第31-32页 |
| ·融合基因表达载体pET-22b-cry1Ac-cmg1的构建 | 第32-34页 |
| ·cry1Ac、cmg1及融合基因Ac-cmg1原核表达及SDS-PAGE检测 | 第34-35页 |
| ·cry1Ac、cmg1菌体蛋白的His-tag Western blot | 第35-36页 |
| ·cry1Ac和cmg1蛋白的纯化及多克隆抗体制备 | 第36-37页 |
| ·融合蛋白的Western blot鉴定 | 第37页 |
| ·融合蛋白的复性及大量纯化 | 第37-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-56页 |
| ·生物信息学分析cry1Ac及cmg1 cDNA序列的密码子组成 | 第39页 |
| ·cry1Ac基因与cmg1基因的融合构建 | 第39-48页 |
| ·PCR扩增Bt基因cry1Ac和葡聚糖酶基因cmgI | 第40-43页 |
| ·中间表达载体pET-22b-Ac的构建 | 第43-44页 |
| ·中间表达载体pET-22b-cmg1的构建 | 第44-46页 |
| ·融合基因表达载体pET-22b-Ac-cmg1的构建 | 第46页 |
| ·pET-22b-Ac、pET-22b-cmg1、pET-22b-Ac-cmg1上下游序列分析 | 第46-48页 |
| ·重组蛋白的表达及SDS-PAGE分析 | 第48-51页 |
| ·cry1Ac、cmg1及融合基因Ac-cmg1蛋白的诱导表达 | 第48页 |
| ·cry1Ac、cmg1及融合基因Ac-cmg1蛋白的溶解性分析 | 第48-51页 |
| ·cry1Ac及cmg1抗体制备 | 第51-54页 |
| ·Anti-His单克隆抗体检测cry1Ac及cmg1菌体蛋白 | 第51页 |
| ·cry1Ac及cmg1包涵体蛋白的亲和纯化 | 第51-53页 |
| ·cry1Ac及cmg1纯化蛋白浓度测定 | 第53-54页 |
| ·融合蛋白Ac-cmg1cry1Ac抗体及cmg1抗体Westernblot鉴定 | 第54页 |
| ·融合蛋白Ac-cmg1的亲和纯化 | 第54-56页 |
| 4 讨论与小结 | 第56-61页 |
| ·蛋白表达系统的选择 | 第56-57页 |
| ·原核表达载体的选择 | 第56页 |
| ·大肠杆菌表达菌株的选择 | 第56-57页 |
| ·构建融合基因方法探索 | 第57-58页 |
| ·Ac及cmg1蛋白的Western-Blot检测 | 第58页 |
| ·包涵体蛋白及其复性 | 第58-59页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
| 附录1 大肠杆菌的稀有密码子表 | 第71-72页 |
| 附录2 cry1Ac基因测序结果 | 第72-73页 |
| 附录3 cmg1基因测序结果 | 第73页 |
