融合基因cry2Aa-gna克隆及表达的研究
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-35页 |
| 1 苏云金芽孢杆菌 | 第9-23页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的生物学特性 | 第9-10页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的形态特征 | 第9-10页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的分类 | 第10页 |
| ·杀虫毒素的种类 | 第10-12页 |
| ·δ-内毒素 | 第10页 |
| ·β-外毒素 | 第10-11页 |
| ·芽孢 | 第11页 |
| ·几丁质酶 | 第11页 |
| ·Vips | 第11-12页 |
| ·ZWA | 第12页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白(ICPs) | 第12-23页 |
| ·ICPs基因的分类 | 第12-15页 |
| ·ICPs基因的存在状态 | 第15-16页 |
| ·cry基因的鉴定 | 第16-17页 |
| ·cry基因表达的调控 | 第17-19页 |
| ·杀虫晶体蛋白的分子结构及其功能 | 第19-21页 |
| ·杀虫晶体蛋白的作用机理 | 第21-23页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的研究应用现状 | 第23页 |
| 2 雪花莲凝集素 | 第23-33页 |
| ·植物凝集素简介 | 第23-30页 |
| ·植物凝集素的定义 | 第24-25页 |
| ·植物凝集素的分类 | 第25-26页 |
| ·植物凝集素的性质 | 第26-27页 |
| ·植物凝集素的结构 | 第27-30页 |
| ·雪花莲凝集素研究进展 | 第30-33页 |
| ·雪花莲凝集素的结构与功能 | 第30-31页 |
| ·雪花莲凝集素的作用机理 | 第31页 |
| ·雪花莲凝集素的应用 | 第31-33页 |
| 3 融合基因研究进展 | 第33-34页 |
| 4 课题的立题依据和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-48页 |
| 1 实验材料 | 第35-39页 |
| ·质粒和菌株 | 第35页 |
| ·苏云金芽孢杆菌cry2Aa基因及其质粒载体 | 第35页 |
| ·雪花莲凝集素gna基因及其质粒载体 | 第35页 |
| ·克隆质粒和表达质粒 | 第35页 |
| ·大肠杆菌菌株 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35-36页 |
| ·试剂 | 第36-38页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取溶液 | 第36页 |
| ·抗生素 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE试剂 | 第36-37页 |
| ·Weastern-Blot试剂 | 第37页 |
| ·镍柱纯化试剂 | 第37-38页 |
| ·其它试剂 | 第38页 |
| ·仪器设备 | 第38-39页 |
| 2 研究方法 | 第39-48页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第39-40页 |
| ·cry2Aa基因的PCR | 第40页 |
| ·gna基因的PCR | 第40-41页 |
| ·TA克隆 | 第41页 |
| ·质粒的限制性内切酶双酶切 | 第41-42页 |
| ·连接反应 | 第42页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第42页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌 | 第42-43页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE | 第43-44页 |
| ·制备多克隆抗体 | 第44-45页 |
| ·Western-Blot | 第45-46页 |
| ·制备包涵体 | 第46页 |
| ·镍柱纯化重组蛋白 | 第46-47页 |
| ·蛋白的复性 | 第47-48页 |
| 第三章 结果与分析 | 第48-62页 |
| 1 cry2Aa基因的克隆与表达 | 第48-51页 |
| ·cry2Aa基因的克隆 | 第48-49页 |
| ·cry2Aa基因的表达 | 第49-51页 |
| 2 gna基因的克隆与表达 | 第51-54页 |
| ·gna基因的克隆 | 第51-52页 |
| ·gna基因的表达 | 第52-54页 |
| 3 cry2Aa-gna融合基因的克隆与表达 | 第54-62页 |
| ·cry2Aa-gna融合基因的克隆 | 第54-60页 |
| ·cry2Aa-gna融合基因的表达 | 第60-62页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第62-65页 |
| 1 结论 | 第62页 |
| ·基因的克隆 | 第62页 |
| ·蛋白的表达 | 第62页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第62页 |
| 2 讨论 | 第62-65页 |
| ·融合杀虫基因的优点 | 第62-63页 |
| ·融合杀虫蛋白的杀虫机理 | 第63页 |
| ·构建融合基因方法的探讨 | 第63页 |
| ·蛋白的表达 | 第63-64页 |
| ·本研究的创新之处 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 附录 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
