| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-29页 |
| 1.有机溶剂耐受菌的应用 | 第13-18页 |
| ·生物催化领域 | 第13-15页 |
| ·生物修复领域 | 第15-18页 |
| 2.微生物的有机溶剂耐受机理 | 第18-25页 |
| ·有机溶剂对微生物细胞的毒害机制 | 第18-20页 |
| ·有机溶剂耐受菌的发现及耐受机理研究 | 第20-25页 |
| 3.有机溶剂耐受菌Pseudomonas putida Idaho的研究 | 第25-27页 |
| 4.本课题的出发点 | 第27-29页 |
| 第二章 甘油磷酸酰基转移酶基因(plsB)的克隆表达 | 第29-47页 |
| 1.材料和方法 | 第30-37页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第30页 |
| ·菌株和质粒 | 第30-31页 |
| ·培养基和培养条件 | 第31-32页 |
| ·DNA操作技术 | 第32-36页 |
| ·蛋白表达操作技术 | 第36页 |
| ·有机溶剂耐受性检测 | 第36-37页 |
| 2.结果和讨论 | 第37-45页 |
| ·plsB的扩增 | 第37-38页 |
| ·plsB的序列分析 | 第38-43页 |
| ·plsB的插入验证结果 | 第43页 |
| ·plsB的表达及有机溶剂耐受性的验证 | 第43-45页 |
| 3.小结 | 第45-47页 |
| 第三章 磷脂合成关键基因转录水平的检测 | 第47-61页 |
| 1.材料和方法 | 第49-55页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第49页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·培养基和培养条件 | 第49-50页 |
| ·RNA操作技术 | 第50-53页 |
| ·荧光定量PCR操作技术 | 第53-55页 |
| 2.结果和讨论 | 第55-60页 |
| ·细胞数的定量 | 第55页 |
| ·P.putida Idaho总RNA的提取 | 第55-57页 |
| ·RNA样品中DNA的检测 | 第57-58页 |
| ·DNA去除效果的检测 | 第58-59页 |
| ·各基因最佳退火温度的确定 | 第59页 |
| ·One-step RT-qPCR扩增结果 | 第59-60页 |
| 3.小结 | 第60-61页 |
| 第四章 有机溶剂压力下蛋白质表达差异研究 | 第61-77页 |
| 1.材料和方法 | 第61-72页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第61-63页 |
| ·菌株 | 第63页 |
| ·培养基和培养条件 | 第63-64页 |
| ·样品制备方法的确立 | 第64-67页 |
| ·双向电泳实验条件的优化 | 第67-70页 |
| ·双向电泳平行性实验 | 第70-72页 |
| ·差异蛋白的初步分析 | 第72页 |
| 2.结果和讨论 | 第72-76页 |
| ·间二甲苯对P.putida Idaho菌体生长的影响 | 第72-73页 |
| ·样品制备方法的确立 | 第73-75页 |
| ·平行性实验结果 | 第75-76页 |
| ·差异蛋白初步分析结果 | 第76页 |
| 3.小结 | 第76-77页 |
| 第五章 有机溶剂耐受相关蛋白的鉴定和分析 | 第77-87页 |
| 1.材料和方法 | 第77-80页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第77-78页 |
| ·菌株 | 第78页 |
| ·差异蛋白的软件分析 | 第78-79页 |
| ·差异蛋白的胰酶酶解 | 第79页 |
| ·MALDI-TOF质谱分析 | 第79-80页 |
| ·PMF结果查询 | 第80页 |
| 2.结果和讨论 | 第80-84页 |
| ·PDQuest软件分析结果 | 第80页 |
| ·质谱分析结果 | 第80-84页 |
| 3.小结 | 第84-87页 |
| 结束语 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
