| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第14-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-26页 |
| ·纤维素材料的结构特征 | 第16-17页 |
| ·纤维素生物降解的研究意义 | 第17-18页 |
| ·降解纤维素的微生物 | 第18-19页 |
| ·降解纤维素的真菌 | 第18-19页 |
| ·降解纤维素的细菌 | 第19页 |
| ·纤维素的生物降解机制 | 第19-23页 |
| ·纤维素酶的酶解机制 | 第19-22页 |
| ·纤维素降解过程中碳水化合物结合模块(CBM)的作用 | 第22-23页 |
| ·Cytophaga hutchinsonii研究背景 | 第23-24页 |
| ·论文的立题依据和工作思路 | 第24-26页 |
| 第二章 C.hutchinsonii纤维素相关降解酶基因的序列分析 | 第26-45页 |
| ·材料方法 | 第26-27页 |
| ·实验所用的软件 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-43页 |
| ·C.hutchinsonii糖苷水解酶序列及其结构域的分析 | 第27-35页 |
| ·CBM序列分析、分类和活性位点的预测 | 第35-43页 |
| ·CBM序列分析及分类 | 第35-39页 |
| ·C.hutchinsonii中CBM9的同源性分析 | 第39-43页 |
| ·本章小结 | 第43-45页 |
| 第三章 C.hutchinsonii内切纤维素酶的异源表达、分离纯化和粗酶活的鉴定 | 第45-65页 |
| ·材料 | 第45-49页 |
| ·菌株、质粒和培养基 | 第45-49页 |
| ·菌株和质粒 | 第45-46页 |
| ·培养基 | 第46-49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-55页 |
| ·CHU 1280基因的克隆 | 第49-51页 |
| ·引物设计和PCR扩增程序 | 第49-50页 |
| ·CHU 1280基因片段的回收和连接 | 第50-51页 |
| ·转化及重组质粒的筛选 | 第51页 |
| ·CHU 1280蛋白的异源表达 | 第51-53页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第51页 |
| ·枯草芽孢杆菌转化 | 第51-52页 |
| ·毕赤氏酵母转化 | 第52页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第53页 |
| ·重组蛋白在毕赤氏酵母中的表达 | 第53页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| ·粗酶液的制备 | 第53-54页 |
| ·His tag纯化蛋白 | 第54页 |
| ·离子交换层析 | 第54页 |
| ·TSK-gel phenyl-5PW疏水层析 | 第54页 |
| ·粗酶液酶活的测定 | 第54-55页 |
| ·CMCase酶活的测定 | 第54-55页 |
| ·降解寡糖的酶活测定 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-63页 |
| ·C.hutchinsonii中纤维素降解酶的表达 | 第55-56页 |
| ·CHU 1280在大肠杆菌中的表达 | 第56-58页 |
| ·CHU 1280在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第58-59页 |
| ·CHU 1280在毕赤氏酵母中的表达 | 第59-61页 |
| ·CHU 1280粗酶液酶活的测定 | 第61-63页 |
| ·CMCase酶活的测定 | 第61-62页 |
| ·CHU 1280降解寡糖酶活的测定 | 第62-63页 |
| ·CHU 1280蛋白的纯化 | 第63页 |
| ·本章小结 | 第63-65页 |
| 第四章 C.hutchinsonii碳水化合物结合模块(CBM)结合性质的研究 | 第65-91页 |
| ·实验材料 | 第66-68页 |
| ·菌株、质粒和培养基 | 第66-67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·实验所用的生物学软件 | 第67-68页 |
| ·实验方法 | 第68-72页 |
| ·CHU 2044中cbm9 DNA片段及其突变体Y75W、A75W、Y112A、W183A与其它DNA片段的克隆 | 第68-70页 |
| ·引物设计和PCR扩增程序 | 第68-70页 |
| ·DNA片段的回收和连接 | 第70页 |
| ·转化及重组质粒的筛选 | 第70页 |
| ·蛋白的重组表达 | 第70页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第70-71页 |
| ·CBM9与不溶性多糖的结合 | 第71页 |
| ·CBM9与可溶性多糖的结合 | 第71页 |
| ·CBM9与糖的竞争性结合 | 第71页 |
| ·Ca~(2+)浓度对CBM9与不溶性多糖结合能力的影响 | 第71-72页 |
| ·CBM9序列的模建 | 第72页 |
| ·结果与分析 | 第72-89页 |
| ·CHU 2044中CBM9及相关蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第72-79页 |
| ·CHU 2044基因的克隆 | 第73-74页 |
| ·CBM9在大肠杆菌中的表达 | 第74-75页 |
| ·CBM9的纯化 | 第75-76页 |
| ·CBM9+P、CBM6、CBM6+9和PKD在大肠杆菌中的表达 | 第76-79页 |
| ·CBM9与糖的结合 | 第79-82页 |
| ·CBM9与不溶性多糖的结合 | 第79-80页 |
| ·CBM9与可溶性多糖的结合 | 第80-81页 |
| ·CBM9与可溶性糖的竞争性结合 | 第81页 |
| ·Ca~(2+)浓度对CBM9结合不溶性多糖能力的影响 | 第81-82页 |
| ·CBM9突变体蛋白的构建及性质测定 | 第82-89页 |
| ·CBM9序列的模建 | 第82-85页 |
| ·CBM9突变体蛋白的克隆、表达和纯化 | 第85-87页 |
| ·CBM9突变体蛋白结合性质的测定 | 第87-89页 |
| ·本章小结 | 第89-91页 |
| 全文总结 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第103页 |
