| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第10-24页 |
| 1 产酶溶杆菌的分类及生物学特征 | 第10-11页 |
| 2 产酶溶杆菌的生防机理 | 第11-16页 |
| 2.1 胞外水解酶 | 第12页 |
| 2.2 次级代谢产物 | 第12-16页 |
| 3 Ⅳ型菌毛 | 第16-17页 |
| 4 全局性调控因子Clp的研究进展 | 第17-19页 |
| 4.1 Clp的研究概况 | 第17-18页 |
| 4.2 产酶溶杆菌中Clp的研究进展 | 第18-19页 |
| 5 研究蛋白质之间相互作用的方法 | 第19-21页 |
| 5.1 细菌双杂交系统 | 第19-20页 |
| 5.2 GST pul-down技术 | 第20-21页 |
| 6 LysR家族转录因子的基本特征 | 第21页 |
| 7 本文的研究目的及意义 | 第21-24页 |
| 研究内容 | 第24-72页 |
| 第一章 产酶溶杆菌中与Clp蛋白互作的转录因子的筛选与功能研究 | 第26-54页 |
| 1 试验材料 | 第27-34页 |
| 1.1 供试菌株和质粒 | 第27-29页 |
| 1.2 引物设计 | 第29-32页 |
| 1.3 培养基、培养条件及菌种保存 | 第32-33页 |
| 1.4 试剂及溶液配制 | 第33-34页 |
| 1.5 酶、抗生素、试剂盒及化学试剂 | 第34页 |
| 2 试验方法 | 第34-43页 |
| 2.1 DNA操作方法及体系 | 第34-36页 |
| 2.2 连接产物热转化大肠杆菌DH5α | 第36-37页 |
| 2.3 质粒提取与酶切验证 | 第37-38页 |
| 2.4 产酶溶杆菌OH11转录因子pTRG文库构建 | 第38页 |
| 2.5 细菌双杂交系统筛选 | 第38-39页 |
| 2.6 产酶溶杆菌OH11电转感受态细胞的制备及突变体筛选 | 第39-40页 |
| 2.7 HSAF的提取及HPLC检测 | 第40-41页 |
| 2.8 病原菌拮抗活性测定 | 第41-42页 |
| 2.9 菌体表面活动能力观察 | 第42页 |
| 2.10 胞外酶检测 | 第42-43页 |
| 2.11 菌体沉降性观察 | 第43页 |
| 3 结果分析 | 第43-52页 |
| 3.1 L.enzymogenes OH11中转录因子的生物信息学预测 | 第43-44页 |
| 3.2 转录因子pTRG文库的构建 | 第44页 |
| 3.3 细菌双杂交系统筛选与Clp蛋白互作的转录因子 | 第44-46页 |
| 3.4 获得14个转录因子的缺失突变体 | 第46-48页 |
| 3.5 14个转录因子中△LelysR影响HSAF的产量 | 第48-49页 |
| 3.6 14个转录因子中△LelysR对病原真菌卵菌的拮抗活性明显下降 | 第49-50页 |
| 3.7 14个转录因子不参与调控TM的形成 | 第50-51页 |
| 3.8 14个转录因子不影响主要胞外酶的生物合成 | 第51-52页 |
| 3.9 14个转录因子不影响菌体沉降性 | 第52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 第二章 LysR_(Le)调控HSAF生物合成的机制及其与Clp蛋白互作的生物学意义研究 | 第54-72页 |
| 1 试验材料 | 第54-56页 |
| 1.1 供试菌株和质粒 | 第54-55页 |
| 1.2 引物设计 | 第55-56页 |
| 2 试验方法 | 第56-64页 |
| 2.1 DNA操作方法及体系 | 第56页 |
| 2.2 连接产物热转化大肠杆菌DH5α | 第56-57页 |
| 2.3 质粒提取与酶切验证 | 第57页 |
| 2.4 产酶溶杆菌OH11电转感受态细胞的制备及突变体筛选 | 第57页 |
| 2.5 细菌单杂交实验 | 第57-58页 |
| 2.6 LysRu蛋白表达及纯化 | 第58-60页 |
| 2.7 琼脂糖凝胶阻滞实验(EMSA) | 第60-61页 |
| 2.8 GST pul-down实验 | 第61-62页 |
| 2.9 实时荧光定量PCR | 第62-64页 |
| 3 结果分析 | 第64-69页 |
| 3.1 LysR_(Le)蛋白原核表达载体的验证 | 第64页 |
| 3.2 LysR_(Le)蛋白原核表达 | 第64-65页 |
| 3.3 LysR_(Le)蛋白的定量和Western杂交验证 | 第65-66页 |
| 3.4 LysR_(Le)通过直接结合在pks/nrps基因的启动子区来调控HSAF的生物合成 | 第66-67页 |
| 3.5 GST pull-down实验证明LysR_(Le)与Clp蛋白互作 | 第67-68页 |
| 3.6 LysR_(Le)与Clp相互作用协同调控HSAF的生物合成 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| 全文总结与展望 | 第72-74页 |
| 本论文创新点 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
