| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 上篇 文献综述 | 第10-28页 |
| 第一章 产酶溶杆菌的研究进展 | 第12-20页 |
| 1 产酶溶杆菌(L.enzymogenes)的分类与鉴定 | 第12页 |
| 2 产酶溶杆菌的生物学特征 | 第12-13页 |
| 3 产酶溶杆菌对植物病害的生防作用及机制 | 第13-20页 |
| 3.1 胞外水解酶 | 第14页 |
| 3.2 热稳定抗真菌因子HSAF | 第14-16页 |
| 3.3 细菌运动性 | 第16-20页 |
| 第二章 杂合的双组分蛋白ChpA的研究进展 | 第20-24页 |
| 1 双组分系统 | 第20-21页 |
| 2 Pil-Chp化学信号感应系统 | 第21-22页 |
| 3 ChpA的功能结构 | 第22-24页 |
| 第三章 PilZ结构域蛋白的研究进展 | 第24-28页 |
| 1 PilZ蛋白功能的研究 | 第24-25页 |
| 2 PilZ结构的相关研究 | 第25-28页 |
| 下篇 研究内容 | 第28-68页 |
| 第一章 产酶溶杆菌中ChpA的鉴定及其调控菌体运动性的机制研究 | 第30-50页 |
| 1 试验材料 | 第30-34页 |
| 1.1 供试菌株和质粒 | 第30-31页 |
| 1.2 引物设计 | 第31-33页 |
| 1.3 培养基 | 第33页 |
| 1.4 酶和抗生素 | 第33页 |
| 1.5 试剂盒及化学试剂 | 第33-34页 |
| 2 试验方法 | 第34-42页 |
| 2.1 DNA操作方法及体系 | 第34-36页 |
| 2.2 连接产物热转化大肠杆菌Top10 | 第36-37页 |
| 2.3 质粒的提取与酶切验证 | 第37-38页 |
| 2.4 产酶溶杆菌OH11电转感受态的制备及突变体的筛选 | 第38-39页 |
| 2.5 菌体蹭行运动观测 | 第39页 |
| 2.6 HSAF的提取及HPLC检测 | 第39-40页 |
| 2.7 实时荧光定量PCR(qPCR) | 第40-42页 |
| 2.8 生长曲线的测定 | 第42页 |
| 2.9 数据分析 | 第42页 |
| 3 结果分析 | 第42-49页 |
| 3.1 chpA,pilJ, pilI,pilH缺失突变体的构建 | 第42-43页 |
| 3.2 四个基因缺失突后只有chpA缺失突变体丧失了TM | 第43-44页 |
| 3.3 chpA不参与调控菌体的生长及HSAF的生物合成 | 第44-45页 |
| 3.4 ChpA的结构域缺失突变体的构建 | 第45-46页 |
| 3.5 H-kinase,HPT1,HATPase_c是ChpA调控蹭行运动的必要结构域,而非REC | 第46-47页 |
| 3.6 ChpA广泛调节基因的转录表达 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 第二章 产酶溶杆菌中PilZ蛋白的鉴定及其调控菌体运动性的机制研究 | 第50-68页 |
| 1 试验材料 | 第50-52页 |
| 1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第50-52页 |
| 1.2 引物合成 | 第52页 |
| 2 试验方法 | 第52-58页 |
| 2.1 DNA操作方法及体系 | 第52页 |
| 2.2 连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第52-53页 |
| 2.3 质粒的提取与酶切验证 | 第53页 |
| 2.4 产酶溶杆菌OH11电转感受态的制备及突变体的筛选 | 第53页 |
| 2.5 互补菌株、点突变菌株的构建 | 第53页 |
| 2.6 菌体蹭行运动的观测 | 第53页 |
| 2.7 HSAF的提取及HPLC检测 | 第53页 |
| 2.8 细菌双杂交 | 第53-55页 |
| 2.9 蛋白原核表达 | 第55-56页 |
| 2.10 Western Blot实验 | 第56-57页 |
| 2.11 蛋白-蛋白互作的体外Pull down(以GST标签的蛋白为例) | 第57页 |
| 2.12 微量热泳动法(MST) | 第57-58页 |
| 3 结果分析 | 第58-66页 |
| 3.1 产酶溶杆菌OH11中PilZ蛋白的鉴定 | 第58-59页 |
| 3.2 pilZ缺失突变体、互补菌株的的构建 | 第59-60页 |
| 3.3 PilZ调控菌体运动性 | 第60页 |
| 3.4 PilZ与PilB发生蛋白-蛋白互作 | 第60-62页 |
| 3.5 PilZ关键氨基酸位点鉴定与功能 | 第62-64页 |
| 3.6 PilB关键氨基酸位点鉴定与功能 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 全文总结 | 第76-78页 |
| 本论文创新点 | 第78-80页 |
| 附录 | 第80-86页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
