| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 综述 | 第13-24页 |
| 1.1 紫杉醇的理化性质 | 第13-14页 |
| 1.2 紫杉醇的药用价值 | 第14页 |
| 1.3 紫杉醇来源 | 第14-16页 |
| 1.3.1 采用天然红豆杉植物提取紫杉醇 | 第14页 |
| 1.3.2 红豆杉细胞培养法提取紫杉醇 | 第14-15页 |
| 1.3.3 化学方法全合成紫杉醇 | 第15页 |
| 1.3.4 化学法半合成紫杉醇 | 第15页 |
| 1.3.5 生物发酵法合成紫杉醇 | 第15-16页 |
| 1.4 紫杉醇生物合成途径及相关基因 | 第16-20页 |
| 1.5 提高真菌紫杉醇产量的方法 | 第20-22页 |
| 1.5.1 常规诱变育种 | 第20页 |
| 1.5.2 原生质体诱变育种 | 第20页 |
| 1.5.3 双亲灭活原生质体融合诱变育种 | 第20-21页 |
| 1.5.4 采用基因工程技术构建工程菌株 | 第21页 |
| 1.5.5 发酵条件优化 | 第21-22页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 产紫杉醇内生菌的筛选 | 第24-35页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.2.2 实验试剂及培养基 | 第24-25页 |
| 2.3 主要仪器与设备 | 第25页 |
| 2.4 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.4.1 内生菌的分离 | 第25页 |
| 2.4.2 内生菌的培养及紫杉醇提取 | 第25-26页 |
| 2.4.3 内生菌提取液的检测分析 | 第26页 |
| 2.4.4 产紫杉醇菌株的鉴定 | 第26-29页 |
| 2.5 结果与分析 | 第29-34页 |
| 2.5.1 内生菌的分离及培养 | 第29页 |
| 2.5.2 内生菌提取液的分析 | 第29-33页 |
| 2.5.3 产紫杉醇菌株的鉴定结果 | 第33-34页 |
| 2.6 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 枝状枝孢霉MD2的紫杉醇合成相关候选基因的克隆 | 第35-45页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第35-36页 |
| 3.2.1 材料 | 第35页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第35页 |
| 3.2.3 培养基 | 第35-36页 |
| 3.3 主要仪器设备 | 第36页 |
| 3.4 实验方法 | 第36-38页 |
| 3.4.1 枝霉MD2基因组DNA的提取 | 第36页 |
| 3.4.2 诱导不同时间点枝霉MD2的总RNA提取 | 第36页 |
| 3.4.3 总RNA反转第一链cDNA | 第36-37页 |
| 3.4.4 筛选紫杉醇合成候选基因 | 第37页 |
| 3.4.5 候选基因的引物设计 | 第37-38页 |
| 3.4.6 候选基因的克隆及序列分析 | 第38页 |
| 3.5 结果 | 第38-44页 |
| 3.5.1 基因组DNA和诱导不同时间点总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 3.5.2 筛选紫杉醇合成相关基因 | 第39-41页 |
| 3.5.3 克隆候选基因的引物结果 | 第41-42页 |
| 3.5.4 候选基因的克隆及分析 | 第42-44页 |
| 3.6 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 候选Unigenes的拷贝数和表达特征分析 | 第45-55页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第45-46页 |
| 4.2.1 材料 | 第45页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第45-46页 |
| 4.3 主要仪器设备 | 第46-47页 |
| 4.4 实验方法 | 第47-50页 |
| 4.4.1 枝霉MD2基因组DNA的提取 | 第47页 |
| 4.4.2 枝霉MD2基因组DNA的纯化 | 第47页 |
| 4.4.3 候选基因的酶切位点分析 | 第47页 |
| 4.4.4 候选基因的拷贝数分析 | 第47-50页 |
| 4.4.5 候选基因的表达特征分析 | 第50页 |
| 4.5 结果 | 第50-54页 |
| 4.5.1 枝霉MD2基因组DNA的纯化 | 第50-51页 |
| 4.5.2 候选基因的酶切位点分析 | 第51页 |
| 4.5.3 候选基因的拷贝数分析 | 第51-52页 |
| 4.5.4 候选基因的表达特征分析 | 第52-54页 |
| 4.6 小结 | 第54-55页 |
| 第五章 候选UnigeneA09801和A03231的原核表达和超表达分析 | 第55-76页 |
| 5.1 引言 | 第55页 |
| 5.2 材料与试剂 | 第55-57页 |
| 5.3 主要仪器设备 | 第57页 |
| 5.4 方法 | 第57-66页 |
| 5.4.1 UnigeneA09801和A03231的功能预测 | 第57页 |
| 5.4.2 UnigeneA09801和A03231的原核表达载体构建 | 第57-60页 |
| 5.4.3 UnigeneA09801和A03231原核表达条件优化 | 第60-61页 |
| 5.4.4 UnigeneA09801和A03231的超表达载体构建 | 第61-64页 |
| 5.4.5 UnigeneA09801和A03231超表达初步分析 | 第64-66页 |
| 5.5 结果 | 第66-75页 |
| 5.5.1 UnigeneA09801和A03231的结构和功能预测 | 第66-68页 |
| 5.5.2 UnigeneA09801和A03231原核表达分析 | 第68-71页 |
| 5.5.3 UnigeneA09801和A03231的超表达载体构建及初步分析 | 第71-75页 |
| 5.6 小结 | 第75-76页 |
| 第六章 总结与展望 | 第76-78页 |
| 6.1 总结 | 第76-77页 |
| 6.2 本文的创新之处 | 第77页 |
| 6.3 展望 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 读硕期间已发表文章 | 第88页 |
