| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 VDACs的生物学特征 | 第11-18页 |
| 1.1.1 VDACs的序列和结构 | 第11-12页 |
| 1.1.2 VDACs的亚细胞定位 | 第12-13页 |
| 1.1.3 VDACs的功能 | 第13-16页 |
| 1.1.3.1 VDACs参与物质的运输和代谢 | 第13-14页 |
| 1.1.3.2 VDACs参与线粒体介导的细胞凋亡 | 第14-15页 |
| 1.1.3.3 VDACs参与非生物胁迫 | 第15-16页 |
| 1.1.4 VDACs互作蛋白的相关研究 | 第16页 |
| 1.1.5 OsVDACs及其互作蛋白研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2 蛋白质相互作用研究方法 | 第18-19页 |
| 1.2.1 酵母双杂交技术 | 第18页 |
| 1.2.2 免疫共沉淀技术 | 第18-19页 |
| 1.2.3 GST pull-down技术 | 第19页 |
| 1.2.4 双分子荧光互补技术(BiFC) | 第19页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 酵母双杂交验证OsVDAC5与OsV5IP1-7的互作 | 第21-36页 |
| 2.1 实验材料、试剂及设备 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-32页 |
| 2.2.1 pPR3-N-OsV5IP1-7表达载体的构建 | 第23-30页 |
| 2.2.2 OsVDAC5(1-75aa)与OsV5IP1-7互作的验证 | 第30-32页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第32-35页 |
| 2.3.1 水稻YTB叶片总RNA的提取及检测 | 第32页 |
| 2.3.2 pPR3-N-OsV5IP1-7表达载体的构建 | 第32-34页 |
| 2.3.3 OsVDAC5(1-75aa)与OsV5IP1-7互作的验证 | 第34-35页 |
| 2.4 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 GST pull-down验证OsVDAC5与OsV5IP1-2的互作 | 第36-60页 |
| 3.1 实验材料、试剂及设备 | 第36-39页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第37-39页 |
| 3.1.3 实验设备 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-48页 |
| 3.2.1 含GST标签的OsVDAC5(1-75aa)与含His标签的OsV5IP1-2原核表达载体的构建 | 第39-44页 |
| 3.2.2GST-OsVDAC5(1-75aa)、His-OsV5IP1(1-239aa)、His-OsV5IP1(240-364aa)、His-OsV5IP2(1-90aa)和His-OsV5IP2(91-210aa)融合蛋白的诱导表达 | 第44-47页 |
| 3.2.3 GST pull-down验证GST-OsVDAC5(1-75aa)融合蛋白与His-OsV5IP1(1-239aa)、His-OsV5IP2(1-90aa)和His-OsV5IP2(91-210aa)融合蛋白的相互作用 | 第47-48页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第48-59页 |
| 3.3.1 OsV5IP1和OsV5IP2的序列分析 | 第48页 |
| 3.3.2 pGEX-4T1OsVDAC5(1-75aa)原核表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.3.3 pET-32a-OsV5IP1(1-239aa)/-OsV5IP1(240-364aa)原核表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.3.4 pET-32a-OsV5IP2(1-90aa)/-OsV5IP2(91-210aa)原核表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 3.3.5 GST-OsVDAC5(1-75aa)融合蛋白诱导表达及Western blot检测 | 第51-53页 |
| 3.3.6 His-OsV5IP1(1-239aa)/-OsV5IP1(240-364aa)融合蛋白诱导表达Western blot检测 | 第53-56页 |
| 3.3.7 His-OsV5IP2(1-90aa)/-OsV5IP1(91-210aa)融合蛋白诱导表达及Western blot检测 | 第56-57页 |
| 3.3.8 GST-OsVDAC5(1-75aa)与His-OsV5IP1(1-239aa)相互作用验证 | 第57页 |
| 3.3.9 GST-OsVDAC5(1-75aa)与His-OsV5IP2(1-90aa)相互作用验证 | 第57-58页 |
| 3.3.10 GST-OsVDAC5(1-75aa)与His-OsV5IP2(91-210aa)相互作用验证 | 第58-59页 |
| 3.4 小结 | 第59-60页 |
| 第四章 BiFC验证OsVDAC5与OsV5IP1-2的互作 | 第60-68页 |
| 4.1 实验材料、试剂及设备 | 第60-62页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第61-62页 |
| 4.1.3 实验设备 | 第62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-65页 |
| 4.2.1 烟草培养 | 第62页 |
| 4.2.2 BiFC相关引物设计 | 第62-63页 |
| 4.2.3 目的片段的获得 | 第63页 |
| 4.2.4 Gateway入门载体的构建 | 第63页 |
| 4.2.5 pSPYN(C)E-OsVDAC5(1-75aa)/-OsV5IP1/-OsV5IP2载体的构建 | 第63-64页 |
| 4.2.6 BiFC验证OsVDAC5(1-75aa)与OsV5IP1和OsV5IP2的互作 | 第64-65页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第65-67页 |
| 4.3.1 pDONR207-OsVDAC5(1-75aa)/-OsV5IP1/-OsV5IP2载体的构建 | 第65页 |
| 4.3.2 pSPYN(C)E-OsVDAC5(1-75aa)/-OsV5IP1/-OsV5IP2载体的构建 | 第65-66页 |
| 4.3.3 BiFC验证OsVDAC5(1-75aa)与OsV5IP1的互作 | 第66-67页 |
| 4.3.4 BiFC验证OsVDAC5(1-75aa)与OsV5IP2的互作 | 第67页 |
| 4.4 小结 | 第67-68页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
