| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第15-32页 |
| 1.1 低氧现象 | 第15-16页 |
| 1.1.1 潮间带低氧 | 第15页 |
| 1.1.2 海域低氧 | 第15-16页 |
| 1.2 海洋贝类对低氧的适应机制 | 第16-25页 |
| 1.2.1 低氧下海洋贝类的生理响应机制 | 第18-19页 |
| 1.2.2 低氧下海洋贝类的代谢抑制 | 第19-20页 |
| 1.2.3 低氧下海洋贝类的无氧代谢 | 第20-25页 |
| 1.3 低氧信号通路 | 第25-31页 |
| 1.3.1 脯氨酸羟基化酶PHD | 第26-27页 |
| 1.3.2 低氧诱导因子HIF | 第27-29页 |
| 1.3.3 低氧响应基因 | 第29-31页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 1.4.1 本研究的目的 | 第31页 |
| 1.4.2 本研究的意义 | 第31-32页 |
| 第二章 长牡蛎低氧诱导因子HIF的功能研究 | 第32-68页 |
| 2.1 引言 | 第32-33页 |
| 2.2 材料和方法 | 第33-46页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第33页 |
| 2.2.2 主要生物试剂 | 第33-34页 |
| 2.2.3 主要仪器与耗材 | 第34-35页 |
| 2.2.4 实验所用引物 | 第35-36页 |
| 2.2.5 牡蛎低氧处理 | 第36-37页 |
| 2.2.6 总RNA提取 | 第37页 |
| 2.2.7 cDNA的合成 | 第37-38页 |
| 2.2.8 RACE技术获取基因 | 第38-39页 |
| 2.2.9 实时荧光定量PCR（qRT-PCR） | 第39页 |
| 2.2.10 基因序列分析 | 第39-40页 |
| 2.2.11 表达载体构建与质粒转化 | 第40页 |
| 2.2.12 酵母感受态制备及质粒转化 | 第40-41页 |
| 2.2.13 酵母双杂交 | 第41页 |
| 2.2.14 细胞培养，转染及低氧处理 | 第41-42页 |
| 2.2.15 双荧光素酶报告基因实验 | 第42页 |
| 2.2.16 蛋白免疫印迹实验 | 第42-43页 |
| 2.2.17 原核蛋白重组表达 | 第43页 |
| 2.2.18 凝胶迁移电泳 | 第43-45页 |
| 2.2.19 基因共表达网络构建 | 第45-46页 |
| 2.3 结果 | 第46-64页 |
| 2.3.1 干露表达谱数据的基因共表达网络分析 | 第46-51页 |
| 2.3.2 长牡蛎HIF家族的克隆及序列分析 | 第51-56页 |
| 2.3.3 长牡蛎HIF家族不同组织表达模式分析 | 第56-58页 |
| 2.3.4 长牡蛎HIF家族的低氧应答 | 第58-61页 |
| 2.3.5 长牡蛎HIF家族α亚基的HRE依赖型转录活性 | 第61-63页 |
| 2.3.6 长牡蛎HIF家族α和β亚基间的蛋白互作 | 第63-64页 |
| 2.4 讨论 | 第64-66页 |
| 2.5 结论 | 第66-68页 |
| 第三章 长牡蛎羟基化酶基因PHD的功能研究 | 第68-87页 |
| 3.1 引言 | 第68-69页 |
| 3.2 材料和方法 | 第69-72页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第69页 |
| 3.2.2 主要生物试剂 | 第69页 |
| 3.2.3 主要仪器与耗材 | 第69页 |
| 3.2.4 实验所用引物 | 第69-71页 |
| 3.2.5 总RNA提取 | 第71页 |
| 3.2.6 cDNA的合成 | 第71页 |
| 3.2.7 RACE技术获取基因 | 第71页 |
| 3.2.8 实时荧光定量PCR（qRT-PCR） | 第71页 |
| 3.2.9 基因序列分析 | 第71页 |
| 3.2.10 表达载体构建与质粒转化 | 第71页 |
| 3.2.11 细胞培养及转染 | 第71页 |
| 3.2.12 蛋白免疫共沉淀 | 第71-72页 |
| 3.2.13 双荧光素酶报告基因实验 | 第72页 |
| 3.2.14 蛋白免疫印迹实验 | 第72页 |
| 3.3 结果 | 第72-84页 |
| 3.3.1 长牡蛎PHD2基因的克隆及鉴定 | 第72-75页 |
| 3.3.2 长牡蛎PHD2B基因具有三个可变剪切 | 第75-76页 |
| 3.3.3 长牡蛎PHD2基因的时空表达模式分析 | 第76-77页 |
| 3.3.4 牡蛎PHD2对HIF-α的羟基化修饰活性 | 第77-79页 |
| 3.3.5 牡蛎PHD2对HIF-α蛋白稳定性和转录活性的影响 | 第79-81页 |
| 3.3.6 牡蛎PHD2A的β2β3环区域与其底物HIF-α结合有关 | 第81-84页 |
| 3.4 讨论 | 第84-86页 |
| 3.5 结论 | 第86-87页 |
| 第四章 长牡蛎HIF-α对PHD2的负反馈调节 | 第87-101页 |
| 4.1 引言 | 第87页 |
| 4.2 材料和方法 | 第87-90页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第87-88页 |
| 4.2.2 主要生物试剂 | 第88页 |
| 4.2.3 主要仪器与耗材 | 第88页 |
| 4.2.4 实验所用引物 | 第88-89页 |
| 4.2.5 牡蛎低氧处理 | 第89页 |
| 4.2.6 总RNA提取 | 第89页 |
| 4.2.7 cDNA的合成 | 第89页 |
| 4.2.8 实时荧光定量PCR（qRT-PCR） | 第89页 |
| 4.2.9 表达载体构建与质粒转化 | 第89页 |
| 4.2.10 蛋白亚细胞定位 | 第89-90页 |
| 4.2.11 细胞培养，转染及低氧处理 | 第90页 |
| 4.2.12 双荧光素酶报告基因实验 | 第90页 |
| 4.2.13 蛋白免疫印迹实验 | 第90页 |
| 4.2.14 原核蛋白重组表达 | 第90页 |
| 4.2.15 凝胶迁移电泳 | 第90页 |
| 4.3 结果 | 第90-98页 |
| 4.3.1 低氧对长牡蛎PHD2的mRNA及蛋白水平的影响 | 第90-92页 |
| 4.3.2 低氧对长牡蛎PHD2亚细胞定位的影响 | 第92-93页 |
| 4.3.3 牡蛎HIF-α对PHD2启动子活性的影响 | 第93-96页 |
| 4.3.4 牡蛎PHD2A启动子区存在低氧反应元件HRE | 第96-98页 |
| 4.4 讨论 | 第98-99页 |
| 4.5 结论 | 第99-101页 |
| 第五章 长牡蛎HIF-α基因对能量代谢的调控 | 第101-112页 |
| 5.1 引言 | 第101-102页 |
| 5.2 材料和方法 | 第102-106页 |
| 5.2.1 实验动物 | 第102页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第102-103页 |
| 5.2.3 主要仪器与耗材 | 第103页 |
| 5.2.4 总RNA提取 | 第103页 |
| 5.2.5 cDNA的合成 | 第103页 |
| 5.2.6 表达载体构建与质粒转化 | 第103页 |
| 5.2.7 细胞培养及转染 | 第103页 |
| 5.2.8 双荧光素酶报告基因实验 | 第103-104页 |
| 5.2.9 高效毛细电泳测定有机酸 | 第104页 |
| 5.2.10 牡蛎低氧胁迫下耗氧率 | 第104-106页 |
| 5.3 结果 | 第106-110页 |
| 5.3.1 牡蛎低氧胁迫下耗氧率 | 第106页 |
| 5.3.2 牡蛎低氧胁迫下有机酸 | 第106-108页 |
| 5.3.3 牡蛎低氧胁迫下糖酵解基因表达量 | 第108-109页 |
| 5.3.4 牡蛎HIF-α对糖酵解基因中PEPCK的转录调控 | 第109-110页 |
| 5.4 讨论 | 第110-111页 |
| 5.5 结论 | 第111-112页 |
| 第六章 总结 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-129页 |
| 附录 | 第129-133页 |
| 致谢 | 第133-135页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第135页 |
