| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 引言 | 第12-16页 |
| 1.1 斑节对虾简介 | 第12页 |
| 1.2 细胞自噬及免疫 | 第12-13页 |
| 1.3 自噬相关基因ATG5-ATG12的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4 miRNA简介 | 第14-15页 |
| 1.5 miRNA调控自噬相关基因研究进展 | 第15页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 第二章 自噬相关基因的克隆和组织表达 | 第16-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 实验研究动物 | 第16页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.3 实验试剂与配制 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-28页 |
| 2.2.1 斑节对虾总RNA提取和cDNA的合成 | 第18-19页 |
| 2.2.2 斑节对虾基因cDNA全长的克隆 | 第19-26页 |
| 2.2.3 序列分析与系统进化树的构建 | 第26页 |
| 2.2.4 组织表达分析 | 第26-28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-34页 |
| 2.3.1 PmATG5和PmATG12基因的鉴定与特征 | 第28-29页 |
| 2.3.2 PmATG5和PmATG12进化树分析 | 第29-33页 |
| 2.3.3 斑节对虾PmATG5和PmATG12的组织分布 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 斑节对虾中靶向沉默ATG5-ATG12共轭系统的MICRORNAS及SIRNAS的筛选 | 第36-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第36页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第36页 |
| 3.1.3 实验试剂与配制 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-40页 |
| 3.2.1 调控基因的miRNA的筛选 | 第37页 |
| 3.2.2 哈维弧菌和无乳链球菌胁迫实验 | 第37页 |
| 3.2.3 siRNA的合成及注射 | 第37-38页 |
| 3.2.4 双荧光素报告 | 第38页 |
| 3.2.5 Small RNA 的提取和逆转录 | 第38-40页 |
| 3.3 实验结果 | 第40-49页 |
| 3.3.1 靶向沉默ATG5-ATG12共轭系统的microRNAs的筛选 | 第40-46页 |
| 3.3.2 靶向沉默ATG5-ATG12共轭系统的siRNA的筛选 | 第46-47页 |
| 3.3.3 菌应激下其他免疫相关基因的表达模式 | 第47-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-53页 |
| 第四章 MIRNA与ATG5-ATG12共轭系统的调控关系研究 | 第53-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第53页 |
| 4.1.2 实验试剂与配制 | 第53-54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.2.1 样品总RNA的提取与cDNA的合成 | 第54页 |
| 4.2.2 miRNA的注射 | 第54页 |
| 4.2.3 总蛋白的提取 | 第54-55页 |
| 4.2.4 SDS-PAGE蛋白跑胶及蛋白免疫印迹(Western Blotting) | 第55-56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-59页 |
| 4.3.1 miR-7562对PmATG5和PmATG12转录水平的调控 | 第56-58页 |
| 4.3.2 蛋白浓度测定标准曲线 | 第58页 |
| 4.3.3 miR-7562介导细胞自噬的发生 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 斑节对虾MIR-7562介导下ATG5-ATG12共轭系统应答哈维弧菌胁迫的作用机制研究 | 第61-69页 |
| 5.1 实验材料 | 第61页 |
| 5.1.1 实验仪器 | 第61页 |
| 5.1.2 实验试剂与配制 | 第61页 |
| 5.2 实验方法 | 第61-63页 |
| 5.2.1 PmATG5和PmATG12基因的体外重组、蛋白纯化及抗体制备 | 第61-63页 |
| 5.2.2 miRNA、siRNA的注射 | 第63页 |
| 5.3 实验结果 | 第63-67页 |
| 5.3.1 哈维弧菌刺激下miR-7562通过调控ATG5-ATG12共轭系统影响细胞自噬发生 | 第63-66页 |
| 5.3.2 哈维弧菌刺激下ATG5-ATG12共轭系统与细胞自噬发生密切相关 | 第66-67页 |
| 5.4 讨论 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 附录 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
