| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 引言 | 第14-18页 |
| 第一章 梅山猪耳成纤维细胞系的建立 | 第18-31页 |
| 1.1 材料 | 第18-19页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第18页 |
| 1.1.2 主要仪器耗材 | 第18-19页 |
| 1.1.3 试验试剂 | 第19页 |
| 1.1.4 主要溶液的配制 | 第19页 |
| 1.2 方法 | 第19-24页 |
| 1.2.1 细胞建系 | 第19-20页 |
| 1.2.2 细胞传代培养 | 第20页 |
| 1.2.3 细胞冻存 | 第20-21页 |
| 1.2.4 细胞复苏 | 第21页 |
| 1.2.5 冷冻前后细胞存活率 | 第21页 |
| 1.2.6 冻后细胞生长曲线 | 第21-22页 |
| 1.2.7 细胞微生物污染检验 | 第22-23页 |
| 1.2.8 细胞染色体标本的制备 | 第23页 |
| 1.2.9 细胞同工酶酶谱分析 | 第23-24页 |
| 1.2.10 脂质体介导转染和单克隆培养 | 第24页 |
| 1.3 结果 | 第24-29页 |
| 1.3.1 成纤维细胞体外培养形态学观察 | 第24-25页 |
| 1.3.2 成纤维细胞冷冻前后细胞存活率 | 第25-26页 |
| 1.3.3 成纤维细胞生长的动态观察 | 第26页 |
| 1.3.4 微生物污染检测 | 第26-27页 |
| 1.3.5 染色体核型分析 | 第27页 |
| 1.3.6 同工酶谱分析 | 第27-28页 |
| 1.3.7 脂质体介导的绿色荧光蛋白转染成纤维细胞结果 | 第28-29页 |
| 1.4 讨论 | 第29-31页 |
| 第二章 维生素E对猪耳成纤维细胞传代过程中抗凋亡能力的研究 | 第31-41页 |
| 2.1 材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第31页 |
| 2.1.2 主要仪器耗材 | 第31页 |
| 2.1.3 试验试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第32页 |
| 2.2 方法 | 第32-34页 |
| 2.2.1 成纤维细胞培养 | 第32页 |
| 2.2.2 MTT法检测成纤维细胞增殖 | 第32页 |
| 2.2.3 成纤维细胞线粒体膜电位的变化 | 第32页 |
| 2.2.4 成纤维细胞凋亡检测 | 第32-33页 |
| 2.2.5 RT-PCR检测成纤维细胞相关基因的变化 | 第33-34页 |
| 2.2.6 数据分析 | 第34页 |
| 2.3 结果 | 第34-39页 |
| 2.3.1 维生素E对细胞增值的影响 | 第34-35页 |
| 2.3.2 维生素E对细胞线粒体膜电位的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.3 细胞凋亡早期检测 | 第36-38页 |
| 2.3.4 成纤维细胞相关基因mRNA表达量 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 冷冻保存对猪耳成纤维细胞H19和IGF2R基因DNA甲基化和基因表达的影响 | 第41-53页 |
| 3.1 材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第41页 |
| 3.1.2 主要仪器耗材 | 第41-42页 |
| 3.1.3 试验试剂 | 第42页 |
| 3.1.4 主要溶液的配制 | 第42页 |
| 3.2 方法 | 第42-48页 |
| 3.2.1 细胞来源 | 第42页 |
| 3.2.2 细胞DNA提取 | 第42页 |
| 3.2.3 DNA甲基化处理 | 第42-43页 |
| 3.2.4 巢氏PCR、测序及甲基化分析 | 第43-46页 |
| 3.2.5 RNA提取、反转录和RT-PCR检测 | 第46-47页 |
| 3.2.6 数据分析 | 第47-48页 |
| 3.3 结果 | 第48-51页 |
| 3.3.1 冷冻前后猪耳成纤维细胞中H19和IGF2R基因差异甲基化区扩增结果 | 第48页 |
| 3.3.2 冷冻前后细胞H19基因和IGF2R基因甲基化状态及分析 | 第48-50页 |
| 3.3.3 冷冻前后猪耳成纤维细胞甲基化相关基因表达量 | 第50-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 硕士期间主要科研成果 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
