球毛壳菌聚酮合酶基因的沉默对CheA合成的影响
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第9-26页 |
| 1.1 课题来源 | 第9页 |
| 1.2 课题背景及研究的目的和意义 | 第9-10页 |
| 1.3 研究现状 | 第10-24页 |
| 1.3.1 毛壳菌及其次级代谢产物 | 第10-13页 |
| 1.3.2 聚酮合酶 | 第13-19页 |
| 1.3.3 RNAi | 第19-24页 |
| 1.4 课题主要研究内容及技术路线 | 第24-26页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第26-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.3 酶和试剂 | 第27页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-36页 |
| 2.2.1 次级代谢产物的萃取条件优化 | 第27-28页 |
| 2.2.2 球毛壳菌敏感性测试 | 第28页 |
| 2.2.3 球毛壳菌总DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.4 基因pks保守序列的扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.5 沉默质粒p S-pks的构建 | 第30-32页 |
| 2.2.6 球毛壳菌的原生质体转化 | 第32页 |
| 2.2.7 转化子的筛选与鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.8 球毛壳菌总RNA的提取及RT-PCR | 第33-34页 |
| 2.2.9 球毛壳菌pks基因表达时间检测 | 第34页 |
| 2.2.10实时定量PCR检测基因表达量 | 第34-35页 |
| 2.2.11 HPLC检测次级代谢产物浓度 | 第35页 |
| 2.2.12平板对峙实验 | 第35-36页 |
| 第3章 球毛壳菌pks基因沉默质粒的构建 | 第36-43页 |
| 3.1 pks基因的获得及保守序列的克隆 | 第36-38页 |
| 3.2 沉默质粒中间体p S1BK的构建 | 第38-40页 |
| 3.3 沉默质粒p S-pks的构建及验证 | 第40-42页 |
| 3.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 第4章 球毛壳菌的转化及转化子的筛选鉴定 | 第43-51页 |
| 4.1 球毛壳菌对潮霉素B的敏感性测试 | 第43-44页 |
| 4.2 球毛壳菌原生质体的制备 | 第44页 |
| 4.3 沉默转化子的鉴定及筛选 | 第44-49页 |
| 4.3.1 沉默转化子的鉴定 | 第44-48页 |
| 4.3.2 沉默转化子的筛选 | 第48-49页 |
| 4.4 本章小结 | 第49-51页 |
| 第5章 转化子的特性研究 | 第51-61页 |
| 5.1 基因pks表达时序的确定 | 第51-52页 |
| 5.2 Che A的检测和萃取条件优化 | 第52页 |
| 5.3 转化子c DNA的获得 | 第52-53页 |
| 5.4 pks基因的表达量差异及分析 | 第53-55页 |
| 5.5 Che A产量差异及分析 | 第55-57页 |
| 5.6 抑菌能力差异及分析 | 第57-59页 |
| 5.7 本章小结 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
