摘要 | 第4-5页 |
ABSTRACT | 第5页 |
第1章 绪论 | 第8-22页 |
1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第8页 |
1.2 小分子量G蛋白家族概述 | 第8-11页 |
1.3 Rap亚族及Rap2 的功能 | 第11-15页 |
1.3.1 Rap亚族概述 | 第11-13页 |
1.3.2 Rap2 的功能 | 第13-15页 |
1.4 Rap2 的相互作用蛋白 | 第15-17页 |
1.4.1 PARG1 | 第15页 |
1.4.2 RPIP8/ RPIP9 | 第15-16页 |
1.4.3 MINK | 第16页 |
1.4.4 MAP4K4 | 第16-17页 |
1.4.5 TNIK | 第17页 |
1.5 Vimentin功能简介 | 第17-20页 |
1.5.1 中间纤维概述 | 第17-18页 |
1.5.2 Vimentin的结构功能 | 第18-20页 |
1.6 课题研究内容及技术路线 | 第20页 |
1.7 技术路线 | 第20-22页 |
第2章 实验材料与方法 | 第22-38页 |
2.1 实验材料 | 第22-24页 |
2.1.1 PCR所需引物 | 第22页 |
2.1.2 质粒、细胞系和菌株 | 第22页 |
2.1.3 主要试剂材料及试剂配方 | 第22-24页 |
2.2 实验方法 | 第24-38页 |
2.2.1 细胞培养技术和样本的收集 | 第24-26页 |
2.2.2 细胞转染和稳转细胞系的鉴定 | 第26-27页 |
2.2.3 免疫共沉淀(CoIP)实验 | 第27-28页 |
2.2.4 Western Blot检测蛋白水平 | 第28-29页 |
2.2.5 Neuhoff胶体染色 | 第29-30页 |
2.2.6 胶内酶切方法 | 第30页 |
2.2.7 DH5α/GM2163 感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
2.2.8 重组体构建和目的片段扩增 | 第31-34页 |
2.2.9 免疫荧光实验 | 第34-35页 |
2.2.10 酵母双杂交实验 | 第35-37页 |
2.2.11 细胞运动能力的检测 | 第37-38页 |
第3章 肾癌细胞系中Rap2 相互作用蛋白的研究 | 第38-43页 |
3.1 NC65-Rap2 稳定表达细胞系的鉴定 | 第38-39页 |
3.2 Rap2 可能的相互作用蛋白的获得 | 第39-41页 |
3.3 讨论 | 第41页 |
3.4 本章小结 | 第41-43页 |
第4章Rap2 与Vimentin和H2B相互作用的研究 | 第43-53页 |
4.1 Rap2 与Vimentin相互作用关系的验证 | 第43-46页 |
4.1.1 免疫荧光实验 | 第43-44页 |
4.1.2 免疫共沉淀(CoIP)实验 | 第44-45页 |
4.1.3 酵母双杂交实验 | 第45-46页 |
4.2 Rap2 与Vimentin共表达对NC65 细胞的运动能力的影响 | 第46-47页 |
4.3 Rap2 与H2B相互作用关系的验证 | 第47-51页 |
4.3.1 免疫荧光实验 | 第47-49页 |
4.3.2 免疫共沉淀(Co IP)实验 | 第49-51页 |
4.4 讨论 | 第51-52页 |
4.5 本章小结 | 第52-53页 |
结论 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-63页 |
致谢 | 第63-64页 |
附录 | 第64-66页 |