| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩略词表 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-31页 |
| 1.1 引言 | 第17页 |
| 1.2 白术的概况 | 第17页 |
| 1.3 白术的有效成分及其生物活性 | 第17-19页 |
| 1.3.1 白术多糖 | 第17-18页 |
| 1.3.2 白术内酯类化合物 | 第18-19页 |
| 1.4 巨噬细胞与免疫 | 第19-22页 |
| 1.5 树突状细胞与免疫 | 第22-25页 |
| 1.6 巨噬细胞与炎症 | 第25-27页 |
| 1.7 本课题的提出 | 第27-31页 |
| 1.7.1 研究目标 | 第27页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第27-28页 |
| 1.7.3 拟解决的关键问题 | 第28-29页 |
| 1.7.4 拟采取的研究方法、研究方案 | 第29-31页 |
| 第二章 白术多糖的制备及对 RAW264.7 细胞功能的影响 | 第31-56页 |
| 2.1 前言 | 第31-32页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第32-35页 |
| 2.2.1 试剂 | 第32-33页 |
| 2.2.2 仪器与设备 | 第33-34页 |
| 2.2.3 溶液的配制 | 第34-35页 |
| 2.3. 实验方法与步骤 | 第35-42页 |
| 2.3.1 白术多糖制备方法 | 第35-36页 |
| 2.3.2 白术多糖提取工艺优化 | 第36-37页 |
| 2.3.3 RAW264.7 细胞的培养 | 第37-38页 |
| 2.3.4 细胞形态学观察 | 第38页 |
| 2.3.5 MTT 法检测白术多糖对巨噬细胞生长的影响 | 第38-39页 |
| 2.3.6 细胞蛋白的提取和 Western blotting | 第39-40页 |
| 2.3.7 ELISA 法检测白术多糖对巨噬细胞分泌细胞因子的影响 | 第40-41页 |
| 2.3.8 Griess 法检测白术多糖对巨噬细胞分泌 NO 的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.9 流式细胞术检测白术多糖对巨噬细胞的吞噬功能的影响 | 第42页 |
| 2.3.10 TLR4 抗体对白术多糖诱导巨噬细胞产生 TNF-α和 NO 的影响 | 第42页 |
| 2.3.11 TLR4 抗体对白术多糖诱导巨噬细胞吞噬功能的影响 | 第42页 |
| 2.3.12 统计学处理 | 第42页 |
| 2.4 结果 | 第42-53页 |
| 2.4.1 白术多糖提取单因素实验结果 | 第42-45页 |
| 2.4.2 白术多糖提取工艺优化 | 第45-46页 |
| 2.4.3 白术多糖对巨噬细胞形态学观察 | 第46页 |
| 2.4.4 白术多糖对巨噬细胞生长的影响 | 第46-47页 |
| 2.4.5 白术多糖对巨噬细胞表面 TLR4 表达的影响 | 第47-48页 |
| 2.4.6 白术多糖对巨噬细胞 TNF-α和 IFN-γ生成的影响 | 第48-49页 |
| 2.4.7 白术多糖对巨噬细胞分泌 NO 的影响 | 第49-51页 |
| 2.4.8 白术多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响 | 第51-52页 |
| 2.4.9 TLR4 抗体对白术多糖诱导巨噬细胞产生 NO 和 TNF-α的影响 | 第52页 |
| 2.4.10 TLR4 抗体对白术多糖诱导巨噬细胞吞噬功能的影响 | 第52-53页 |
| 2.5 讨论 | 第53-54页 |
| 2.6 本章小结 | 第54-56页 |
| 第三章 p38 激酶分子调控白术多糖诱导的 RAW264.7 细胞 TNF-α和 NO 的水平 | 第56-68页 |
| 3.1 前言 | 第56页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第56-59页 |
| 3.2.1 试剂 | 第56-57页 |
| 3.2.2 仪器与设备 | 第57-58页 |
| 3.2.3 溶液的配制 | 第58-59页 |
| 3.3 实验方法 | 第59-64页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第59-60页 |
| 3.3.2 Western blot 方法检测 p38 激酶活性 | 第60-62页 |
| 3.3.3 免疫荧光 | 第62页 |
| 3.3.4 ELISA 法检测 SB203580 对白术多糖诱导巨噬细胞产生 TNF-α影响 | 第62-63页 |
| 3.3.5 Griess 法检测 SB203580 对白术多糖诱导巨噬细胞产生 NO 影响 | 第63页 |
| 3.3.6 TLR4 抗体对白术多糖诱导巨噬细胞 p38 的激酶活性的影响 | 第63页 |
| 3.3.7 统计学处理 | 第63-64页 |
| 3.4 结果 | 第64-66页 |
| 3.4.1 白术多糖对巨噬细胞 p38 激酶活性的影响 | 第64-65页 |
| 3.4.2 SB203580 抑制白术多糖诱导巨噬细胞分泌 NO | 第65页 |
| 3.4.3 SB203580 抑制白术多糖诱导巨噬细胞分泌 TNF-α | 第65页 |
| 3.4.4 TLR4 抗体抑制白术多糖诱导巨噬细胞 p38 激酶活性 | 第65-66页 |
| 3.5 讨论 | 第66-67页 |
| 3.6 本章小结 | 第67-68页 |
| 第四章 p38/NF-κB 信号通路调控白术多糖诱导的 RAW264.7 细胞 TNF-α和 NO 水平 | 第68-80页 |
| 4.1 前言 | 第68页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第68-71页 |
| 4.2.1 试剂 | 第68-69页 |
| 4.2.2 仪器与设备 | 第69-70页 |
| 4.2.3 溶液的配制 | 第70-71页 |
| 4.3 实验方法 | 第71-76页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第71-73页 |
| 4.3.2 Western blot 方法检测 NF-κB 核转录活性 | 第73-74页 |
| 4.3.3 ELISA 法检测 PDTC 对白术多糖诱导巨噬细胞产生 TNF-α和 IFN-γ的影响 | 第74-75页 |
| 4.3.4 Griess 法检测 PDTC 对白术多糖诱导巨噬细胞产生 NO 的影响 | 第75页 |
| 4.3.5 SB203580 对白术多糖诱导巨噬细胞 NF-κB 活性的影响 | 第75-76页 |
| 4.3.6 TLR4 抗体抑制白术多糖对巨噬细胞 NF-κB 活性的影响 | 第76页 |
| 4.3.7 统计学处理 | 第76页 |
| 4.4 结果 | 第76-79页 |
| 4.4.1 白术多糖对巨噬细胞 IκB 降解和 NF-κB 核转录活性的影响 | 第76-77页 |
| 4.4.2 PDTC 抑制白术多糖诱导巨噬细胞分泌 NO | 第77页 |
| 4.4.3 PDTC 对白术多糖诱导巨噬细胞分泌 TNF-α和 IFN-γ的影响 | 第77-78页 |
| 4.4.4 SB203580 抑制白术多糖诱导巨噬细胞 NF-κB 活性 | 第78页 |
| 4.4.5 TLR4 抗体抑制白术多糖诱导巨噬细胞 NF-κB 活性 | 第78-79页 |
| 4.5 讨论 | 第79页 |
| 4.6 本章小结 | 第79-80页 |
| 第五章 白术多糖对树突状细胞的免疫功能的影响 | 第80-94页 |
| 5.1 前言 | 第80-81页 |
| 5.2 材料和仪器 | 第81-83页 |
| 5.2.1 实验对象 | 第81页 |
| 5.2.2 试剂 | 第81-82页 |
| 5.2.3 仪器与设备 | 第82-83页 |
| 5.2.4 溶液的配制 | 第83页 |
| 5.3 实验方法 | 第83-88页 |
| 5.3.1 人外周血单核细胞分离 | 第83-84页 |
| 5.3.2 人外周血 DC 的体外分化和培养 | 第84-85页 |
| 5.3.3 白术多糖对 DC 细胞形态学影响 | 第85页 |
| 5.3.4 流式细胞术检测白术多糖对 DC 细胞表面标志的影响 | 第85页 |
| 5.3.5 流式细胞术检测白术多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响 | 第85页 |
| 5.3.6 Western blot 方法检测白术多糖对 DC 表面 TLR4 的影响 | 第85-86页 |
| 5.3.7 ELISA 法检测白术多糖对 DC 分泌细胞因子的影响 | 第86-87页 |
| 5.3.8 TLR4 抗体对白术多糖诱导 DC 分泌 IL-12 和 TNF-α的影响 | 第87页 |
| 5.3.9 统计学处理 | 第87-88页 |
| 5.4 结果 | 第88-91页 |
| 5.4.1 白术多糖对 DC 形态的影响 | 第88页 |
| 5.4.2 白术多糖对 DC 表面分子表达的影响 | 第88-89页 |
| 5.4.3 白术多糖对 DC 吞噬功能的影响 | 第89-90页 |
| 5.4.4 白术多糖对 DC 分泌 IL-12 和 TNF-α的影响 | 第90页 |
| 5.4.5 白术多糖对 DC 表面 TLR4 表达的影响 | 第90-91页 |
| 5.4.6 TLR4 抗体对白术多糖诱导 DC 分泌 IL-12 和 TNF-α的影响 | 第91页 |
| 5.5 讨论 | 第91-93页 |
| 5.6 本章小结 | 第93-94页 |
| 第六章 白术内酯Ⅰ对脂多糖诱导的 RAW264.7 细胞抗炎机制研究 | 第94-111页 |
| 6.1 前言 | 第94-95页 |
| 6.2 材料与仪器 | 第95-98页 |
| 6.2.1 试剂 | 第95-96页 |
| 6.2.2 仪器与设备 | 第96-97页 |
| 6.2.3 溶液的配制 | 第97-98页 |
| 6.3 实验方法 | 第98-103页 |
| 6.3.1 细胞培养 | 第98-99页 |
| 6.3.2 MTT 法检测白术内酯 I 对巨噬细胞生长活性的影响 | 第99-100页 |
| 6.3.3 Western blot 方法检测 MAPK 及 NF-κB 信号通路 | 第100-101页 |
| 6.3.4 ELISA 法检测巨噬细胞分泌 TNF-α和 IL-6 | 第101-102页 |
| 6.3.5 Griess 法测定 NO | 第102-103页 |
| 6.3.6 统计学处理 | 第103页 |
| 6.4 结果 | 第103-108页 |
| 6.4.1 白术内酯 I 对巨噬细胞生长活性的影响 | 第103页 |
| 6.4.2 白术内酯 I 对 LPS 诱导的巨噬细胞分泌 TNF-α和 IL-6 的影响 | 第103-104页 |
| 6.4.3 白术内酯 I 对 LPS 诱导的巨噬细胞分泌 NO 的影响 | 第104-105页 |
| 6.4.4 白术内酯 I 对 LPS 诱导的巨噬细胞 MAPK 通路的影响 | 第105-106页 |
| 6.4.5 白术内酯 I 对 LPS 诱导的巨噬细胞 NF-κB 通路的影响 | 第106页 |
| 6.4.6 白术内酯 I 对 LPS 诱导的巨噬细胞 MD-2、CD14、CR3、SR-A、TLR4 和 MyD88的影响 | 第106-108页 |
| 6.5 讨论 | 第108-109页 |
| 6.6 本章小结 | 第109-111页 |
| 第七章 白术内酯Ⅲ对脂多糖诱导的 RAW264.7 细胞抗炎机制研究 | 第111-125页 |
| 7.1 前言 | 第111页 |
| 7.2 材料和仪器 | 第111-114页 |
| 7.2.1 试剂 | 第111-112页 |
| 7.2.2 仪器与设备 | 第112-113页 |
| 7.2.3 溶液的配制 | 第113-114页 |
| 7.3 实验方法 | 第114-119页 |
| 7.3.1 细胞培养 | 第114-115页 |
| 7.3.2 MTT 法检测白术内酯Ⅲ对 RAW264.7 细胞生长活性的影响 | 第115-116页 |
| 7.3.3 Western blot 方法检测 MAPK 及 NF-κB 信号通路 | 第116-118页 |
| 7.3.4 ELISA 法检测巨噬细胞分泌 TNF-α、IL-6 和 PGE2102 | 第118页 |
| 7.3.5 Griess 法检测巨噬细胞分泌 NO | 第118-119页 |
| 7.3.6 统计学处理 | 第119页 |
| 7.4 结果 | 第119-122页 |
| 7.4.1 白术内酯Ⅲ对巨噬细胞生长活性的影响 | 第119-120页 |
| 7.4.2 白术内酯Ⅲ对 LPS 诱导的巨噬细胞分泌 NO 的影响 | 第120页 |
| 7.4.3 白术内酯Ⅲ对 LPS 诱导的巨噬细胞分泌 PGE2、TNF-α和 IL-6 的影响 | 第120-121页 |
| 7.4.4 白术内酯Ⅲ对 LPS 诱导的巨噬细胞 MAPK 信号通路的影响 | 第121-122页 |
| 7.4.5 白术内酯Ⅲ对 LPS 诱导的巨噬细胞 NF-κB 通路的影响 | 第122页 |
| 7.5 讨论 | 第122-123页 |
| 7.6 本章小结 | 第123-125页 |
| 结论与展望 | 第125-129页 |
| 1. 结论 | 第125-127页 |
| 2. 论文创新点 | 第127-128页 |
| 3. 展望 | 第128-129页 |
| 参考文献 | 第129-148页 |
| 攻读博士期间取得的研究成果 | 第148-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
| 附件 | 第151页 |
