| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-40页 |
| ·弧菌和弧菌病 | 第13-14页 |
| ·海水养殖鱼类的致病弧菌 | 第13页 |
| ·感染人类的病原性弧菌 | 第13-14页 |
| ·重要的海水养殖致病菌——溶藻弧菌 | 第14-20页 |
| ·溶藻弧菌的致病机理和主要毒力因子 | 第14-17页 |
| ·胞外蛋白酶 | 第15-16页 |
| ·铁载体 | 第16页 |
| ·胞外多糖和生物被膜 | 第16页 |
| ·三型分泌系统 | 第16-17页 |
| ·群体感应系统 | 第17-20页 |
| ·费氏弧菌中的LuxR/LuxI系统 | 第17-18页 |
| ·哈维氏弧菌中的杂合型系统 | 第18-19页 |
| ·群体感应系统LuxR转录调控因子 | 第19-20页 |
| ·重要传染病霍乱致病菌——霍乱弧菌 | 第20-31页 |
| ·霍乱疫情 | 第21页 |
| ·霍乱弧菌的致病机理与毒力因子 | 第21-22页 |
| ·研究霍乱弧菌致病机理的动物模型 | 第22-25页 |
| ·霍乱疫苗 | 第25-28页 |
| ·注射型疫苗 | 第25页 |
| ·口服型灭活疫苗 | 第25-26页 |
| ·口服型减毒活疫苗 | 第26-27页 |
| ·单位疫苗 | 第27-28页 |
| ·霍乱弧菌鞭毛和运动性 | 第28-31页 |
| ·霍乱弧菌鞭毛功能和结构 | 第28页 |
| ·鞭毛与免疫系统 | 第28-31页 |
| ·食物中毒重要致病菌——副溶血弧菌 | 第31-37页 |
| ·副溶血弧菌引发的食物中毒事件 | 第31-32页 |
| ·副溶血弧菌的主要致病因子 | 第32-37页 |
| ·耐热直接溶血素(TDH) | 第32-34页 |
| ·TDH相关溶血毒素(TRH) | 第34页 |
| ·尿素酶 | 第34页 |
| ·三型分泌系统 | 第34-37页 |
| ·研究副溶血弧菌致病机理的动物模型 | 第37页 |
| ·本课题的主要内容和意义 | 第37-40页 |
| 第2章 溶藻弧菌luxR基因的克隆、突变株构建及功能鉴定 | 第40-60页 |
| ·前言 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·菌种、质粒、引物和培养基 | 第40页 |
| ·主要试剂、试剂盒和仪器设备 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-49页 |
| ·溶藻弧菌luxR_(val)基因克隆及测序 | 第41-43页 |
| ·溶藻弧菌luxR_(val)基因无标记缺失突变株的构建 | 第43-45页 |
| ·克隆luxR_(val)内部基因 | 第44页 |
| ·pDM-luxR质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·筛选目的突变株 | 第45页 |
| ·溶藻弧菌互补菌株luxR_(val)~+的构建 | 第45-46页 |
| ·溶藻弧菌生长特性的考察 | 第46页 |
| ·胞外蛋白酶活性测定 | 第46页 |
| ·游动性和群游性测定 | 第46页 |
| ·胞外多糖的测定 | 第46-48页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第48-49页 |
| ·实验结果 | 第49-58页 |
| ·溶藻弧菌luxR_(val)基因的克隆及测序及序列分析 | 第50页 |
| ·筛选和鉴定luxR_(val)基因无标记缺失突变株 | 第50-52页 |
| ·溶藻弧菌△luxR_(val)互补株构建结果 | 第52页 |
| ·溶藻弧菌野生株和突变株△luxR_(val)的生长情况 | 第52-53页 |
| ·luxR_(val)基因在生长周期中的表达情况 | 第53-55页 |
| ·溶藻弧菌luxR_(val)突变对胞外蛋白酶活性的影响 | 第55-56页 |
| ·溶藻弧菌luxR_(val)突变对运动性的影响 | 第56-58页 |
| ·溶藻弧菌luxR_(val)突变对胞外多糖合成的影响 | 第58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 第3章 溶藻弧菌碱性丝氨酸蛋白酶Asp毒力作用及调控 | 第60-73页 |
| ·前言 | 第60页 |
| ·实验材料 | 第60-62页 |
| ·菌株、质粒、引物和培养基 | 第60-62页 |
| ·主要试剂、生物软件和及仪器设备 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-65页 |
| ·碱性丝氨酸蛋白酶基因asp的克隆与测序 | 第62页 |
| ·蛋白酶基因asp插入失活突变株的构建 | 第62-63页 |
| ·胞外蛋白酶活性测定 | 第63页 |
| ·斑马鱼感染实验 | 第63-64页 |
| ·细胞毒性检测 | 第64-65页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第65页 |
| ·实验结果 | 第65-71页 |
| ·溶藻弧菌asp基因的克隆、测序及序列分析 | 第65页 |
| ·插入突变株asp~-的构建 | 第65页 |
| ·Asp对胞外蛋白酶活性的影响 | 第65-67页 |
| ·Asp对斑马鱼毒力的作用 | 第67-68页 |
| ·Asp对EPC细胞的毒性作用 | 第68页 |
| ·溶藻弧菌asp基因在整个生长周期中的表达情况 | 第68-69页 |
| ·群体感应系统对asp的调控 | 第69-71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 第4章 霍乱弧菌减毒活疫苗副作用的研究 | 第73-95页 |
| ·前言 | 第73-74页 |
| ·实验材料 | 第74-76页 |
| ·菌株、质粒、引物和培养基 | 第74-76页 |
| ·主要试剂、仪器设备和分析处理软件 | 第76页 |
| ·实验方法 | 第76-83页 |
| ·绿色荧光蛋白GFP标记的霍乱弧菌构建 | 第76-79页 |
| ·霍乱弧菌突变株和互补菌株flaA~+的构建 | 第79-80页 |
| ·生长曲线测定 | 第80页 |
| ·霍乱弧菌游动性测定 | 第80页 |
| ·免疫印迹试验 | 第80-81页 |
| ·透射电子显微镜观察霍乱弧菌鞭毛 | 第81页 |
| ·霍乱弧菌感染新生幼兔试验 | 第81-82页 |
| ·新生幼兔肠道内的霍乱弧菌计数 | 第82页 |
| ·组织病理切片制备、苏木精及伊红染色及切片显微镜观察 | 第82页 |
| ·冷冻切片制备,免疫染色及激光切片共聚焦显微镜观察 | 第82-83页 |
| ·RNA提取以及实时荧光定量PCR试验 | 第83页 |
| ·实验结果 | 第83-93页 |
| ·新生幼兔模型的应用 | 第83-86页 |
| ·霍乱弧菌Peru-NT鞭毛突变株的构建及表型检测 | 第86-87页 |
| ·Peru-NT鞭毛蛋白突变株疫苗不具有副作用——新生幼兔腹泻现象消失 | 第87-89页 |
| ·腹泻现象并非由霍乱菌株在肠道内克隆繁殖能力差异和定位差异造成 | 第89-90页 |
| ·Peru-NT鞭毛蛋白突变株降低了宿主对霍乱弧菌的免疫反应 | 第90-93页 |
| ·讨论 | 第93-94页 |
| ·小结 | 第94-95页 |
| 第5章 副溶血弧菌的致病机理 | 第95-117页 |
| ·前言 | 第95-96页 |
| ·实验材料 | 第96-99页 |
| ·菌株、质粒、引物和培养基 | 第96-97页 |
| ·主要试剂、仪器设备和分析处理软件 | 第97-99页 |
| ·实验方法 | 第99-103页 |
| ·生长曲线测定 | 第99页 |
| ·绿色荧光蛋白GFP标记的副溶血弧菌构建 | 第99-100页 |
| ·副溶血弧菌感染新生幼兔试验 | 第100-101页 |
| ·感染后的新生幼兔肠道内液体的收集 | 第101页 |
| ·感染后的新生幼兔肠道内副溶血弧菌菌落计数 | 第101页 |
| ·组织病理切片制备,苏木精及伊红染色及切片显微镜观察 | 第101-102页 |
| ·冷冻切片制备,免疫染色及切片激光共聚焦显微镜观察 | 第102页 |
| ·RNA提取以及实时荧光定量PCR实验 | 第102-103页 |
| ·实验结果 | 第103-113页 |
| ·新生幼兔动物模型的应用 | 第103页 |
| ·副溶血弧菌感染幼兔导致腹泻因幼兔个体不同而有差异 | 第103-104页 |
| ·第二套三型分泌系统(T3SS2)是副溶血弧菌的主要毒力因子 | 第104-106页 |
| ·副溶血弧菌野生型及其突变株在肠道内的克隆繁殖和定位 | 第106-112页 |
| ·副溶血弧菌的感染增强了宿主的免疫反应 | 第112-113页 |
| ·副溶血弧菌感染后的幼兔肠道组织切片 | 第113页 |
| ·讨论 | 第113-116页 |
| ·小结 | 第116-117页 |
| 第6章 结论和展望 | 第117-121页 |
| ·主要结论 | 第117-118页 |
| ·创新点 | 第118-119页 |
| ·展望 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-132页 |
| 攻读博士学位期间撰写的论文 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
