致谢 | 第10-11页 |
缩略语表 | 第11-12页 |
摘要 | 第12-13页 |
Abstract | 第13页 |
第一章 文献综述 | 第14-19页 |
引言 | 第14页 |
1 水稻中的PT家族分类 | 第14-15页 |
2 PHT1家族介绍 | 第15-17页 |
3 PHT2家族介绍 | 第17页 |
4 PHT3和PHT4家族介绍 | 第17-19页 |
第二章 OsPht1;3和OsPht1;5超表达载体构建及转基因 | 第19-24页 |
1 材料 | 第19页 |
1.1 菌种 | 第19页 |
1.2 质粒 | 第19页 |
1.3 工具酶 | 第19页 |
1.4 转基因材料 | 第19页 |
1.5 实验仪器 | 第19页 |
1.6 分析软件 | 第19页 |
2 方法 | 第19-23页 |
2.1 OsPht1;3和OsPht1;5超表达载体构建 | 第19-20页 |
2.2 农杆菌介导的水稻转化 | 第20-23页 |
2.2.1 水稻成熟胚愈伤组织的准备 | 第20-21页 |
2.2.2 共培养和抗性愈伤组织的选择 | 第21-22页 |
2.2.2.1 农杆菌培养 | 第21页 |
2.2.2.2 感菌与共培养 | 第21页 |
2.2.2.3 选择培养 | 第21-22页 |
2.2.3 抗性愈伤组织的诱导分化和生根 | 第22页 |
2.2.4 转基因苗的锻炼和移栽 | 第22页 |
2.2.5 水稻营养液的配制 | 第22-23页 |
3 载体构建结果分析 | 第23-24页 |
第三章 OsPht1;3和OsPht1;5超表达转基因材料后代分析 | 第24-34页 |
1 材料 | 第24页 |
2 方法 | 第24-31页 |
2.1 抗性基因检测方法 | 第24-26页 |
2.1.1 配制TPS提取液 | 第24-25页 |
2.1.2 水稻基因组DNA的微量DNA提取(TPS方法) | 第25页 |
2.1.3 PCR鉴定 | 第25-26页 |
2.2 转基因水稻的RT-PCR的检测 | 第26-28页 |
2.2.1 植物总RNA的提取 | 第26-27页 |
2.2.2 逆转录及半定量RT-PCR | 第27-28页 |
2.3 转基因水稻的SOUTHERN BLOT检测 | 第28-31页 |
2.3.1 植物基因组DNA的大量提取 | 第28-30页 |
2.3.1.1 基因组DNA提取液的配置 | 第28-29页 |
2.3.1.2 植物基因组DNA提取步骤 | 第29-30页 |
2.3.2 采用Hind Ⅲ对转基因水稻DNA样品进行以下操作 | 第30-31页 |
3 结果分析 | 第31-34页 |
3.1 潮霉素PCR鉴定结果 | 第31-32页 |
3.2 半定量RT-PCR鉴定结果 | 第32页 |
3.3 SOUTHERN BLOT鉴定结果 | 第32-34页 |
第四章 OsPht1;3和OsPht1;5超表达转基因株系表型分析 | 第34-42页 |
1 材料 | 第34页 |
2 方法 | 第34-36页 |
2.1 有效磷含量的测定 | 第34-36页 |
2.1.1 试剂配制 | 第34-35页 |
2.1.2 操作步骤 | 第35页 |
2.1.3 磷标准曲线的制作 | 第35-36页 |
2.2 植物微波消解及ICP-OES测定元素方法 | 第36页 |
3 结果与分析 | 第36-42页 |
3.1 T_1代OsPht1;3和OsPht1;5超表达株系水培表型观察 | 第36-38页 |
3.2 T_1代OsPht1;3和OsPht1;5超表达株系有效磷含量的测定结果 | 第38-39页 |
3.3 OsPht1;3和OsPht1;5超表达株系全磷和其他元素的ICP测定结果 | 第39-42页 |
结论 | 第42-44页 |
参考文献 | 第44-49页 |