| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-16页 |
| ·氰基水解酶的分类 | 第10页 |
| ·腈水解酶的来源 | 第10-13页 |
| ·腈水解酶的结构 | 第13页 |
| ·腈水解酶的应用价值 | 第13-14页 |
| ·腈水解酶的研究状况 | 第14-15页 |
| ·国外研究状况 | 第14-15页 |
| ·国内研究状况 | 第15页 |
| ·我单位腈水解酶应用现状及开题意义 | 第15页 |
| ·本章小结 | 第15-16页 |
| 第2章 Arthrobacter nitroguajacolicus腈水解酶基因的克隆 | 第16-40页 |
| ·引言 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-22页 |
| ·主要分析方法 | 第16-17页 |
| ·酶活的测定 | 第16页 |
| ·蛋白质的测定 | 第16页 |
| ·OD_(600)值测定 | 第16页 |
| ·蛋白质测序 | 第16页 |
| ·引物合成及DNA测序 | 第16-17页 |
| ·Arthrobacter nitroguajacolicus菌的培养 | 第17页 |
| ·大肠杆菌DH5α、BL21(DE3)的培养 | 第17页 |
| ·主要实验技术 | 第17-20页 |
| ·细菌基因组的提取 | 第17页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第17页 |
| ·DNA电泳凝胶回收 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌感受态制备及转化 | 第18页 |
| ·从大肠杆菌中提取质粒 | 第18-19页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第19-20页 |
| ·基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·酶的分离纯化 | 第20页 |
| ·克隆方法 | 第20-21页 |
| ·基因的表达 | 第21-22页 |
| ·结果与讨论 | 第22-38页 |
| ·酶的分离纯化 | 第22-29页 |
| ·酶的稳定性 | 第22-24页 |
| ·酶的分子量 | 第24-25页 |
| ·粗酶液的获得 | 第25页 |
| ·酶的柱层析 | 第25-28页 |
| ·N端蛋白质序列分析 | 第28-29页 |
| ·基因的克隆 | 第29-37页 |
| ·基因文库的构建及筛选 | 第29-31页 |
| ·目标基因的获得 | 第31-34页 |
| ·NYNitp序列初步分析 | 第34-37页 |
| ·基因的表达 | 第37-38页 |
| ·本章小结 | 第38-40页 |
| 第3章 重组菌E. coli BL21(DE3)-pETNYNit诱导条件及培养优化 | 第40-58页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-42页 |
| ·主要分析方法 | 第40页 |
| ·酶活的测定 | 第40页 |
| ·OD_(600)值测定 | 第40页 |
| ·重组菌诱导条件优化 | 第40-41页 |
| ·重组菌发酵培养生长曲线 | 第40-41页 |
| ·重组菌诱导因素实验 | 第41页 |
| ·重组菌发酵培养基优化 | 第41页 |
| ·重组菌种龄实验 | 第41-42页 |
| ·结果和讨论 | 第42-56页 |
| ·重组菌诱导表达条件的优化 | 第42-44页 |
| ·重组菌发酵培养基优化 | 第44-55页 |
| ·发酵培养基优化实验 | 第44-48页 |
| ·发酵培养基优化实验二 | 第48-52页 |
| ·发酵培养基优化实验三 | 第52-55页 |
| ·水质实验 | 第55页 |
| ·种龄实验 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-58页 |
| 第4章 重组菌E.coli BL21(DE3)-pETNYNit~d的构建 | 第58-62页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-59页 |
| ·主要分析方法 | 第58页 |
| ·酶活的测定 | 第58页 |
| ·OD_(600)值测定 | 第58页 |
| ·质粒pETNYNit~d的构建 | 第58-59页 |
| ·两株重组菌的比较 | 第59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-61页 |
| ·质粒pETNYNit~d的构建 | 第59页 |
| ·两株重组菌的比较 | 第59-61页 |
| ·本章小结 | 第61-62页 |
| 第5章 重组菌E. coli BL21(DE3)-pETNYNit~d的乳糖诱导表达 | 第62-66页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-63页 |
| ·主要分析方法 | 第62页 |
| ·酶活的测定 | 第62页 |
| ·OD_(600)值测定 | 第62页 |
| ·培养条件调整 | 第62-63页 |
| ·乳糖诱导浓度考察 | 第63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-64页 |
| ·培养条件调整 | 第63-64页 |
| ·乳糖诱导浓度考察 | 第64页 |
| ·本章小结 | 第64-66页 |
| 第6章 结论与展望 | 第66-70页 |
| ·全文总结 | 第66-68页 |
| ·Arthrobacter nitroguajacolicus腈水解酶基因的克隆 | 第66页 |
| ·重组菌E.coli BL21(DE3)-pETNYNit的构建 | 第66页 |
| ·重组菌E.coli BL21(DE3)-pETNYNit的培养优化 | 第66-67页 |
| ·诱导条件优化 | 第66-67页 |
| ·发酵培养基优化 | 第67页 |
| ·重组菌E.coli BL21(DE3)-pETNYNit~d的构建 | 第67页 |
| ·乳糖取代IPTG诱导表达 | 第67-68页 |
| ·结论与创新点 | 第68-69页 |
| ·展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 附录一 | 第74-77页 |
| 附录二 | 第77-79页 |
| 卷内备考表 | 第79-80页 |
