| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-29页 |
| ·无细胞蛋白质表达体系的研究进展 | 第11-25页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·无细胞蛋白表达体系的种类 | 第11-12页 |
| ·无细胞蛋白表达的机理 | 第12-15页 |
| ·常用无细胞表达体系抽提物的制备过程 | 第15-17页 |
| ·大肠杆菌无细胞抽提物的制备过程 | 第15-16页 |
| ·兔网织红细胞裂解物制备 | 第16页 |
| ·家蚕丝腺抽提物的制备 | 第16页 |
| ·麦胚抽提物的制备 | 第16-17页 |
| ·无细胞表达体系应用的能量体系 | 第17-20页 |
| ·无细胞体系的反应器类型 | 第20-23页 |
| ·无细胞反应体系的优缺点 | 第23-24页 |
| ·无细胞蛋白质表达体系的应用和前景 | 第24-25页 |
| ·腺苷酸转运体(ANT) | 第25-28页 |
| ·腺苷酸转运体 | 第25-27页 |
| ·腺苷酸转运体的应用 | 第27页 |
| ·腺苷酸转运体异源表达的解决方法 | 第27-28页 |
| ·本课题研究的方向 | 第28-29页 |
| 第二章 表达载体的构建 | 第29-34页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·质粒 | 第29页 |
| ·大肠杆菌菌株 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29-30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·实验及分析方法 | 第30-31页 |
| ·分子克隆相关实验 | 第30-31页 |
| ·质粒抽提 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备和质粒转化 | 第30页 |
| ·胶回收纯化DNA | 第30-31页 |
| ·表达载体构建 | 第31-34页 |
| ·eGFP表达载体的构建 | 第31页 |
| ·sjANT表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·pIVEX2.4c-eGFP和pSJ-sjANT载体的酶切鉴定 | 第32-34页 |
| 第三章 E.coli无细胞表达体系的构建和优化 | 第34-50页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·实验材料与方法 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌菌株 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·菌体浓度测定 | 第34页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第35页 |
| ·Western Blotting分析 | 第35页 |
| ·绿色荧光蛋白eGFP荧光强度测定 | 第35页 |
| ·无细胞表达体系的构建 | 第35-39页 |
| ·E.coli BL21(DE3)和E.coli K12 A19生长曲线的测定 | 第35-37页 |
| ·大肠杆菌抽提物的制备 | 第37-38页 |
| ·无细胞体系试剂的配制 | 第38-39页 |
| ·自制无细胞体系表达蛋白质 | 第39-40页 |
| ·能量体系和系统组成 | 第39-40页 |
| ·蛋白质的测定 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-50页 |
| ·大肠杆菌抽提物S12效果的检测 | 第40-41页 |
| ·20种氨基酸效果的检测 | 第41-42页 |
| ·无细胞能量体系的确定和实验检测 | 第42-44页 |
| ·NTP浓度和二次能源物质浓度的优化 | 第44-49页 |
| ·相关试剂的混合配制 | 第49-50页 |
| 第四章 不同能量体系的比较 | 第50-58页 |
| ·引言 | 第50页 |
| ·材料与方法 | 第50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-58页 |
| ·不同能量体系的比较 | 第50-53页 |
| ·膜蛋白AqpZ在以cAMP/CP/CK为二次能源系统中的表达和优化 | 第53-56页 |
| ·以cAMP/CP/CK为二次能源物质表达多种蛋白 | 第56-58页 |
| 第五章 ANT蛋白的无细胞表达 | 第58-65页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·材料与方法 | 第58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-65页 |
| ·无细胞表达ANT | 第58-59页 |
| ·反应后在体系中加入表面活性剂 | 第59-61页 |
| ·反应过程中加入表面活性剂 | 第61-65页 |
| 第六章 总结和展望 | 第65-67页 |
| ·总结 | 第65页 |
| ·展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
