| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 黄姑鱼简介 | 第12页 |
| 1.2 水环境中的无机氮及其对鱼类的影响 | 第12-13页 |
| 1.2.1 氨氮 | 第12-13页 |
| 1.2.2 亚硝态氮 | 第13页 |
| 1.2.3 硝态氮 | 第13页 |
| 1.3 氧自由基与抗氧化系统 | 第13-15页 |
| 1.3.1 氧自由基 | 第13-14页 |
| 1.3.2 抗氧化系统 | 第14-15页 |
| 1.4 SOD的研究进展及应用 | 第15-18页 |
| 1.4.1 SOD的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4.2 SOD在水生动物中的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4.3 SOD的应用 | 第18页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第18-20页 |
| 第2章 黄姑鱼IcSOD基因的表达和功能研究 | 第20-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 菌株和载体 | 第20页 |
| 2.1.4 引物 | 第20-21页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第21页 |
| 2.1.6 培养基配置 | 第21-22页 |
| 2.1.7 常用试剂配置 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-34页 |
| 2.2.1 氨氮和亚硝态氮毒性实验 | 第23页 |
| 2.2.2 黄姑鱼健康组织取样 | 第23-24页 |
| 2.2.3 总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.4 cDNA第一条链的合成及检测 | 第25-26页 |
| 2.2.5 NaIcSODcDNA序列筛选及同源片段验证 | 第26-28页 |
| 2.2.6 生物信息学分析 | 第28页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第28-29页 |
| 2.2.8 NaIcSOD的原核表达及蛋白纯化 | 第29-33页 |
| 2.2.9 GSTpull-down | 第33页 |
| 2.2.10 纯化蛋白的SOD酶活测定及其温度/pH稳定性测试 | 第33-34页 |
| 2.3 结果 | 第34-50页 |
| 2.3.1 氨氮和亚硝态氮对黄姑鱼的急性毒性实验 | 第34-36页 |
| 2.3.2 RNA提取及cDNA质量检测 | 第36-37页 |
| 2.3.3 NaIcSOD基因的生物信息学分析 | 第37-42页 |
| 2.3.4 NaIcSODmRNA组织分布和急性毒性实验后的表达变化 | 第42-44页 |
| 2.3.5 NaIcSOD重组表达与纯化 | 第44-48页 |
| 2.3.6 GST下拉寻找与黄姑鱼IcSOD相互作用的蛋白 | 第48-49页 |
| 2.3.7 NaIcSOD的温度/pH稳定性测试 | 第49-50页 |
| 2.4 讨论 | 第50-53页 |
| 第3章 黄姑鱼EcSOD基因的表达和功能研究 | 第53-70页 |
| 3.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第53页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 3.1.3 菌株和载体 | 第53页 |
| 3.1.4 引物 | 第53页 |
| 3.1.5 仪器设备 | 第53页 |
| 3.1.6 培养基配置 | 第53-54页 |
| 3.1.7 常用试剂配置 | 第54页 |
| 3.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 3.2.1 氨氮和亚硝态氮毒性实验 | 第54页 |
| 3.2.2 黄姑鱼健康组织取样 | 第54页 |
| 3.2.3 总RNA的提取 | 第54页 |
| 3.2.4 cDNA第一条链的合成及检测 | 第54页 |
| 3.2.5 NaEcSODcDNA序列筛选及同源片段验证 | 第54页 |
| 3.2.6 生物信息学分析 | 第54页 |
| 3.2.7 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第54页 |
| 3.2.8 NaEcSOD的原核表达及蛋白纯化 | 第54页 |
| 3.2.9 GSTpull-down及蛋白质质谱分析 | 第54-55页 |
| 3.2.10 纯化蛋白的SOD酶活测定及其温度/pH稳定性测试 | 第55页 |
| 3.3 结果 | 第55-67页 |
| 3.3.1 RNA提取及cDNA质量检测 | 第55页 |
| 3.3.2 NaEcSOD基因的生物信息学分析 | 第55-60页 |
| 3.3.3 NaEcSODmRNA组织分布及急性毒性实验后的表达变化 | 第60-62页 |
| 3.3.4 NaEcSOD重组表达与纯化 | 第62-65页 |
| 3.3.5 GST下拉寻找与黄姑鱼EcSOD相互作用的蛋白及其质谱分析 | 第65-66页 |
| 3.3.6 NaEcSOD的温度/pH稳定性测试 | 第66-67页 |
| 3.4 讨论 | 第67-70页 |
| 第4章 黄姑鱼MnSOD基因的表达和功能研究 | 第70-83页 |
| 4.1 实验材料 | 第70-71页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第70页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第70页 |
| 4.1.3 菌株和载体 | 第70页 |
| 4.1.4 引物 | 第70页 |
| 4.1.5 仪器设备 | 第70页 |
| 4.1.6 培养基配置 | 第70-71页 |
| 4.1.7 常用试剂配置 | 第71页 |
| 4.2 实验方法 | 第71页 |
| 4.2.1 氨氮和亚硝态氮毒性实验 | 第71页 |
| 4.2.2 黄姑鱼健康组织取样 | 第71页 |
| 4.2.3 总RNA的提取 | 第71页 |
| 4.2.4 cDNA第一条链的合成及检测 | 第71页 |
| 4.2.5 NaMnSODcDNA序列筛选及同源片段验证 | 第71页 |
| 4.2.6 生物信息学分析 | 第71页 |
| 4.2.7 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第71页 |
| 4.2.8 NaMnSOD的原核表达 | 第71页 |
| 4.3 结果 | 第71-80页 |
| 4.3.1 RNA提取及cDNA质量检测 | 第71-72页 |
| 4.3.2 NaMnSOD基因的生物信息学分析 | 第72-76页 |
| 4.3.3 NaMnSODmRNA组织分布及急性毒性实验后的表达变化 | 第76-78页 |
| 4.3.4 NaMnSOD重组表达 | 第78-80页 |
| 4.4 讨论 | 第80-83页 |
| 第5章 总结 | 第83-85页 |
| 5.1 结论 | 第83页 |
| 5.2 创新点 | 第83-84页 |
| 5.3 展望 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第94页 |
