| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstracts | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-15页 |
| 1.1 植物类受体蛋白激酶(RLKs)的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.1.1 RLKs的结构特点 | 第10-11页 |
| 1.1.2 RLKs的分类 | 第11-12页 |
| 1.1.2.1 富含亮氨酸重复序列型RLKs | 第11页 |
| 1.1.2.2 S型RLKs | 第11页 |
| 1.1.2.3 类凝集素型RLKs | 第11-12页 |
| 1.1.2.4 表皮生长因子型RLKs | 第12页 |
| 1.1.2.5 类肿瘤坏死因子受体型RLKs | 第12页 |
| 1.1.2.6 其他类型的RLKs | 第12页 |
| 1.1.3 RLKs的功能 | 第12-14页 |
| 1.1.3.1 调控植物生长与发育 | 第12-13页 |
| 1.1.3.2 调控花粉自交不亲和性 | 第13页 |
| 1.1.3.3 参与细胞内信号转导 | 第13页 |
| 1.1.3.4 参与抗病防御反应 | 第13-14页 |
| 1.1.3.5 抵抗非生物胁迫 | 第14页 |
| 1.2 水稻中穗发育相关基因的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第15页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第15页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第15页 |
| 第二章 水稻中六个RLKs的数字表达谱及验证 | 第15-22页 |
| 2.1 植物材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 植物材料的培养与取材 | 第15-16页 |
| 2.1.2 酶和试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-20页 |
| 2.2.1 六个RLKs的检索及表达模式预测 | 第17页 |
| 2.2.2 六个RLKs序列的获得 | 第17-18页 |
| 2.2.3 Trizol法提取水稻RNA | 第18页 |
| 2.2.4 RNA反转录合成cDNA | 第18-19页 |
| 2.2.5 qRT-PCR引物设计 | 第19页 |
| 2.2.6 qRT-PCR分析六个RLKs的表达模式 | 第19-20页 |
| 2.3 实验结果 | 第20-22页 |
| 2.3.1 六个RLKs的数字表达谱 | 第20-21页 |
| 2.3.2 六个RLKs在穗发育不同时期的表达模式 | 第21-22页 |
| 2.4 结果及分析 | 第22页 |
| 第三章 水稻六个RLKs蛋白的理化性质及结构分析 | 第22-26页 |
| 3.1 实验方法 | 第22-23页 |
| 3.1.1 六个RLKs所编码蛋白的生物信息学分析 | 第22-23页 |
| 3.1.2 进化树分析 | 第23页 |
| 3.1.3 六个RLKs启动子区分析 | 第23页 |
| 3.2 实验结果 | 第23-26页 |
| 3.2.1 六个RLKs蛋白的理化性质 | 第23页 |
| 3.2.2 六个RLKs的进化树 | 第23-24页 |
| 3.2.3 六个RLKs蛋白的结构 | 第24-25页 |
| 3.2.4 六个RLKs启动子区顺式作用元件 | 第25-26页 |
| 3.3 结果及分析 | 第26页 |
| 第四章 水稻中三个RLKs基因FTPK1、OsRLK940及OsRLK890的遗传转化 | 第26-39页 |
| 4.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 4.2 实验方法 | 第27-32页 |
| 4.2.1 水稻中三个RLKs基因的PCR扩增 | 第27-29页 |
| 4.2.1.1 引物序列设计与PCR扩增 | 第27-28页 |
| 4.2.1.2 PCR产物回收、连接转化 | 第28页 |
| 4.2.1.3 菌液PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 4.2.2 三个水稻RLKs植物双元表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 4.2.2.1 质粒酶切、连接及鉴定 | 第29-30页 |
| 4.2.2.2 农杆菌感受态制备 | 第30页 |
| 4.2.2.3 冻融法转化LBA4404农杆菌感受态 | 第30页 |
| 4.2.3 转基因植株的获得 | 第30-32页 |
| 4.2.3.1 水稻愈伤组织培养 | 第30-31页 |
| 4.2.3.2 愈伤组织侵染 | 第31页 |
| 4.2.3.3 GUS染色 | 第31-32页 |
| 4.2.3.4 水稻基因组DNA的提取 | 第32页 |
| 4.2.3.5 PCR分子检测转基因水稻 | 第32页 |
| 4.3 实验结果 | 第32-38页 |
| 4.3.1 FTPK1全长序列的扩增 | 第32-33页 |
| 4.3.2 OsRLK940全长序列的扩增 | 第33-34页 |
| 4.3.3 OsRLK890全长序列的扩增 | 第34页 |
| 4.3.4 pCAMBIA1301P-FTPK1植物双元表达载体构建 | 第34-35页 |
| 4.3.5 pCAMBIA1301P-OsRLK940植物双元表达载体构建 | 第35-36页 |
| 4.3.6 pCAMBIA1301P-OsRLK890植物双元表达载体构建 | 第36-37页 |
| 4.3.7 GUS组织化学染色法检测转基因水稻 | 第37-38页 |
| 4.3.8 转基因水稻的分子鉴定 | 第38页 |
| 4.4 结果及分析 | 第38-39页 |
| 第五章 水稻RLKs基因FTPK1的理化特性研究 | 第39-62页 |
| 5.1 FTPK1的原核表达及激酶活性检测 | 第39-43页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第39-43页 |
| 5.1.2.1 原核表达载体的构建与转化 | 第39-40页 |
| 5.1.2.2 FTPK1融合蛋白的诱导表达及纯化 | 第40-42页 |
| 5.1.2.3 FTPK1融合蛋白的磷酸激酶活性 | 第42-43页 |
| 5.2 FTPK1的亚细胞定位 | 第43-46页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 5.2.2.1 pCAMBIA2300GFP-FTPK1亚细胞定位载体的构建 | 第44-45页 |
| 5.2.2.2 pCAMBIA2300GFP-FTPK1的荧光信号检测 | 第45-46页 |
| 5.3 酵母双杂交筛选FTPK1的互作蛋白 | 第46-53页 |
| 5.3.1 实验材料与试剂 | 第46-47页 |
| 5.3.2 实验步骤 | 第47-53页 |
| 5.3.2.1 诱饵载体的构建 | 第47页 |
| 5.3.2.2 cDNA文库的构建及其保存 | 第47页 |
| 5.3.2.3 自激活检测及功能验证 | 第47-48页 |
| 5.3.2.4 筛选条件选择 | 第48-49页 |
| 5.3.2.5 膜体系双杂交文库筛选 | 第49-50页 |
| 5.3.2.6 LacZ显色反应 | 第50-51页 |
| 5.3.2.7 阳性克隆酵母质粒抽提 | 第51页 |
| 5.3.2.8 酵母质粒PCR检测及测序 | 第51页 |
| 5.3.2.9 候选互作蛋白的文库载体构建 | 第51-52页 |
| 5.3.2.10 Prey质粒与Bait质粒一对一互作验证 | 第52-53页 |
| 5.4 实验结果 | 第53-61页 |
| 5.4.1 FTPK1的原核表达及激酶检测 | 第53-56页 |
| 5.4.1.1 原核表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 5.4.1.2 FTPK1融合蛋白诱导表达 | 第54-55页 |
| 5.4.1.3 FTPK1融合蛋白纯化及透析 | 第55页 |
| 5.4.1.4 FTPK1融合蛋白磷酸激酶活性检测 | 第55-56页 |
| 5.4.2 FTPK1的亚细胞定位 | 第56-57页 |
| 5.4.3 酵母双杂交检测 | 第57-61页 |
| 5.4.3.1 诱饵载体的构建 | 第57页 |
| 5.4.3.2 自激活检测 | 第57页 |
| 5.4.3.3 筛选条件的确定 | 第57-58页 |
| 5.4.3.4 候选互作蛋白及LacZ染色 | 第58页 |
| 5.4.3.5 阳性菌落质粒的提取及菌落PCR | 第58-59页 |
| 5.4.3.6 NCBI序列比对 | 第59-60页 |
| 5.4.3.7 X-gal活性检测 | 第60-61页 |
| 5.5 结果及分析 | 第61-62页 |
| 第六章 讨论与结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及专利 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
