| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第9-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-20页 |
| 第一章 疱疹病毒UL47基因及其编码蛋白研究进展 | 第15-20页 |
| 1 疱疹病毒概述 | 第15页 |
| 2 鸭瘟病毒概述 | 第15-16页 |
| 3 疱疹病毒UL47基因序列及编码蛋白结构特点 | 第16页 |
| ·疱疹病毒UL47基因序列特点 | 第16页 |
| ·UL47基因编码蛋白结构特点 | 第16页 |
| 4 UL47蛋白的作用 | 第16-18页 |
| ·UL47在病毒复制中的作用 | 第16-17页 |
| ·UL47参与病毒粒子形态发生 | 第17页 |
| ·UL47蛋白参与RNA形成 | 第17页 |
| ·UL47蛋白核质穿梭功能 | 第17页 |
| ·其它作用 | 第17-18页 |
| 5 UL47蛋白与其他蛋白的相互作用 | 第18页 |
| ·UL47蛋白与UL48蛋白 | 第18页 |
| ·UL47蛋白与糖蛋白gp10 | 第18页 |
| ·UL47蛋白与UL46蛋白 | 第18页 |
| 6 展望 | 第18-19页 |
| 7 选题目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二部分 试验研究 | 第20-59页 |
| 第二章 DPV UL47基因分子特性及密码子偏爱性分析 | 第20-34页 |
| 1 材料与方法 | 第20-21页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21页 |
| ·DPV UL47分子特性分析 | 第21页 |
| ·DPV UL47基因密码子偏爱性分析 | 第21页 |
| 2 结果 | 第21-33页 |
| ·核酸序列分析 | 第21-22页 |
| ·蛋白序列分析 | 第22-27页 |
| ·DPV UL47基因密码子偏爱性分析 | 第27-29页 |
| ·DPV UL47密码子与大肠杆菌、酵母及人的密码子偏爱性比较 | 第29-33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| ·UL47基因对鸭瘟病毒分类的意义 | 第33页 |
| ·DPV UL47基因的密码子使用特点 | 第33-34页 |
| 第三章 DPV UL47基因主要抗原域的原核表达及抗体制备 | 第34-49页 |
| 1 材料 | 第34-36页 |
| ·试验材料及动物 | 第34页 |
| ·试剂及配制 | 第34-36页 |
| ·斑点杂交相关溶液 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白纯化相关溶液 | 第36页 |
| ·Western-blot相关溶液 | 第36页 |
| 2 试验方法 | 第36-41页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·病毒DNA的抽提 | 第37页 |
| ·T克隆及测序 | 第37页 |
| ·斑点杂交 | 第37-38页 |
| ·设计寡核苷酸探针 | 第37-38页 |
| ·探针特异性检测 | 第38页 |
| ·斑点杂交 | 第38页 |
| ·表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·T克隆重组质粒及pET-32a(+)的提取 | 第38页 |
| ·DNA片段的酶切和回收 | 第38页 |
| ·构建亚克隆重组质粒 | 第38页 |
| ·DH_(5a)和BL21感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·亚克隆重组质粒的转化 | 第38-39页 |
| ·亚克隆重组质粒的鉴定 | 第39页 |
| ·重组菌的诱导表达及表达条件优化 | 第39-40页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第39页 |
| ·诱导温度优化 | 第39页 |
| ·诱导时间优化 | 第39页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第39页 |
| ·表达形式分析 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·制备高免血清 | 第40页 |
| ·家兔免疫程序 | 第40页 |
| ·琼扩试验检测抗体效价 | 第40页 |
| ·血清的纯化及鉴定 | 第40-41页 |
| ·兔抗UL47血清的纯化 | 第40页 |
| ·Western-blot检测 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-47页 |
| ·PCR扩增 | 第41页 |
| ·T克隆重组质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| ·斑点杂交 | 第42页 |
| ·亚克隆重组质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组菌的诱导表达及条件优化 | 第43-45页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·优化诱导温度 | 第44页 |
| ·优化诱导时间 | 第44页 |
| ·优化IPTG浓度 | 第44-45页 |
| ·表达形式分析 | 第45页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·抗血清的效价测定 | 第46页 |
| ·兔抗UL47 IgG的纯化 | 第46-47页 |
| ·Western-blot检测 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| ·UL47基因分段克隆的依据 | 第47页 |
| ·表达系统的选择 | 第47-48页 |
| ·关于表达蛋白包涵体的形成 | 第48-49页 |
| 第四章 鸭瘟病毒UL47基因的转录时相研究 | 第49-59页 |
| 1 材料 | 第49页 |
| ·主要材料 | 第49页 |
| ·FQ-PCR引物的设计 | 第49页 |
| 2 试验方法 | 第49-51页 |
| ·FQ-PCR cDNA模板的制备 | 第49-50页 |
| ·DEF的培养与病毒接种 | 第49-50页 |
| ·Trizol法提取RNA | 第50页 |
| ·RNA完整性检测 | 第50页 |
| ·反转录合成cDNA | 第50页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第50-51页 |
| ·引物特异性检测 | 第50页 |
| ·FQ-PCR标准曲线的绘制 | 第50页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第50-51页 |
| ·结果分析 | 第51页 |
| 3 结果 | 第51-57页 |
| ·RNA完整性分析 | 第51页 |
| ·引物特异性检验 | 第51-52页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第52-55页 |
| ·UL47基因FQ-PCR标准曲线的制作 | 第52-53页 |
| ·β-actin基因FQ-PCR标准曲线的制作 | 第53-55页 |
| ·FQ-PCR对DPV UL47基因转录时相的定量检测 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| ·关于RNA的抽提 | 第57页 |
| ·荧光定量PCR | 第57-58页 |
| ·鸭瘟病毒UL47基因转录特征 | 第58-59页 |
| 第三部分 结论 | 第59-60页 |
| 第四部分 参考文献 | 第60-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
| 攻读硕士学位期间以第一作者身份发表的论文 | 第71页 |
| 参加研究课题情况 | 第71页 |
