| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-37页 |
| ·Bt 杀虫基因及蛋白研究进展 | 第16-29页 |
| ·Bt 杀虫蛋白分类方法 | 第16-21页 |
| ·3D-Cry 杀虫晶体蛋白结构及进化 | 第21-22页 |
| ·3D-Cry 杀虫晶体蛋白杀虫机理 | 第22-27页 |
| ·昆虫对 Bt Cry 杀虫蛋白抗性 | 第27-29页 |
| ·Bt Cry 杀虫蛋白在转基因作物中的表达研究 | 第29-34页 |
| ·转 Bt Cry 杀虫基因作物商业化概况 | 第29-31页 |
| ·国外转 Bt Cry 杀虫基因作物商业化概况 | 第29-30页 |
| ·我国转 Bt Cry 杀虫基因作物商业化概况 | 第30页 |
| ·转 Bt Cry 杀虫基因作物种植面积及取得的效益 | 第30-31页 |
| ·转 Bt Cry 杀虫蛋白基因工程存在的问题及解决策略 | 第31-34页 |
| ·昆虫对转基因植物的抗性问题及策略 | 第31-32页 |
| ·抗虫基因的表达问题及策略 | 第32-33页 |
| ·植物遗传转化方法存在的问题及策略 | 第33-34页 |
| ·展望 | 第34-35页 |
| ·本研究的目的意义 | 第35-36页 |
| ·本文研究的策略和方法 | 第36-37页 |
| 第二章 Bt 杀虫基因的改构、表达及表达产物的活性研究 | 第37-61页 |
| ·材料 | 第37-40页 |
| ·菌株与植物受体材料 | 第37页 |
| ·本研究中使用的试剂 | 第37页 |
| ·本研究中使用的质粒 | 第37-38页 |
| ·本研究中使用的培养基 | 第38-40页 |
| ·方法 | 第40-47页 |
| ·质粒 DNA 的小量提取 | 第40页 |
| ·DNA 的限制性酶切反应 | 第40-41页 |
| ·农杆菌感受态制备及植物表达载体转化农杆菌 | 第41页 |
| ·菌株及转基因材料 DNA 的 PCR 检测 | 第41-42页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 DNA 片断回收 | 第42页 |
| ·DNA 片段连接 | 第42页 |
| ·质粒 DNA 转化大肠杆菌 | 第42页 |
| ·原核表达杀虫蛋白 | 第42-44页 |
| ·蛋白质 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44-45页 |
| ·烟草无菌苗的培养及叶盘法遗传转化方法 | 第45-46页 |
| ·Kanamycin 抗性植株筛选方法 | 第46页 |
| ·烟草幼苗诱导生根 | 第46页 |
| ·烟草无菌苗的移栽及鉴定 | 第46页 |
| ·Bt 蛋白半致死量（LC50）分析 | 第46页 |
| ·转基因烟草生物测定分析 | 第46-47页 |
| ·结果分析 | 第47-58页 |
| ·Bt 杀虫蛋白结构分析及缺失第一个α螺旋 Bt 基因构建 | 第47-49页 |
| ·构建 Bt 杀虫基因原核表达载体 | 第49-51页 |
| ·改造前后 GFM Cry1A 基因及其融合基因原核表达分析 | 第51-53页 |
| ·原核表达 Bt 杀虫蛋白杀虫活性分析 | 第53-54页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第54页 |
| ·转 Bt 杀虫基因烟草的获得 | 第54-56页 |
| ·转 Bt 杀虫基因烟草的生物测定分析 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第三章 通过细胞器定位提高杀虫蛋白量的研究 | 第61-79页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·菌株与植物受体材料 | 第61页 |
| ·本研究中使用的试剂 | 第61页 |
| ·本研究中使用的有关质粒 | 第61-62页 |
| ·本研究中使用的培养基 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-67页 |
| ·质粒 DNA 的小量提取 | 第62页 |
| ·DNA 的限制性酶切反应 | 第62页 |
| ·农杆菌感受态制备及植物表达载体转化农杆菌 | 第62页 |
| ·菌株及转基因材料 DNA 的 PCR 检测 | 第62-63页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 DNA 片断回收 | 第63页 |
| ·DNA 片段连接 | 第63页 |
| ·质粒 DNA 大肠杆菌转化 | 第63页 |
| ·烟草无菌苗的培养及叶盘法遗传转化方法 | 第63页 |
| ·Kanamycin 抗性植株的筛选及鉴定 | 第63页 |
| ·烟草幼苗诱导生根 | 第63页 |
| ·烟草无菌苗移栽、基因组提取及 PCR 鉴定 | 第63页 |
| ·转 Bt 杀虫基因烟草生物测定 | 第63页 |
| ·GFP 蛋白细胞器定位分析 | 第63页 |
| ·ELISA 检测转基因烟草中 Bt 蛋白含量 | 第63-64页 |
| ·转基因烟草 Bt 基因拷贝数 Southern blot 分析 | 第64-66页 |
| ·荧光定量 PCR 检测转基因烟草 Bt 基因表达水平 | 第66-67页 |
| ·结果分析 | 第67-76页 |
| ·拟南芥线粒体靶向肽（AtMTP）和棉花叶绿体靶向肽（GhCTP）编码序列的获得 | 第67-68页 |
| ·相关植物表达载体的构建 | 第68-69页 |
| ·GFP 蛋白细胞器定位检测 | 第69-70页 |
| ·转 Bt 杀虫基因烟草的获得 | 第70-72页 |
| ·转基因烟草 Bt 基因拷贝数 Southern blot 检测 | 第72页 |
| ·转基因烟草中 Bt 基因 Q-PCR 检测分析 | 第72-73页 |
| ·转基因烟草中 Bt 蛋白含量 ELISA 检测分析 | 第73-75页 |
| ·转 Bt 杀虫基因烟草的生物活性检测 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| ·小结 | 第78-79页 |
| 第四章 农杆菌喷花法转化棉花及转融合抗虫基因棉花的获得 | 第79-94页 |
| ·材料 | 第79-80页 |
| ·植物表达载体和受体材料 | 第79页 |
| ·本研究中使用的试剂 | 第79页 |
| ·本研究中使用的相关引物 | 第79-80页 |
| ·本研究中使用的菌株 | 第80页 |
| ·本研究中使用的培养基 | 第80页 |
| ·方法 | 第80-85页 |
| ·质粒 DNA 的小量提取 | 第80页 |
| ·DNA 的限制性酶切反应 | 第80页 |
| ·融合基因 PCR 扩增检测方法 | 第80页 |
| ·农杆菌电击转化感受态细胞的制备方法 | 第80-81页 |
| ·植物表达载体电击转化农杆菌 | 第81页 |
| ·农杆菌介导喷花法转化棉花及转基因棉花的获得 | 第81-82页 |
| ·棉花基因组 DNA 改良 CTAB 提取方法 | 第82-83页 |
| ·BtCpti 杀虫蛋白表达量 ELISA 检测分析 | 第83页 |
| ·转基因植株 Bt 基因拷贝数的 Southern blot 检测分析 | 第83-85页 |
| ·结果分析 | 第85-91页 |
| ·植物表达载体酶切鉴定和电击转化农杆菌 | 第85-86页 |
| ·农杆菌喷花法转化棉花及 T0代转基因植株的获得 | 第86-87页 |
| ·转基因植株不同世代的获得及基因组 DNA PCR 检测 | 第87-89页 |
| ·T1、T2和 T3代植株 BtCpti 抗虫基因 Southern blot 分析 | 第89-90页 |
| ·T3代转基因植株 BtCpti 融合蛋白 ELISA 检测分析 | 第90-91页 |
| ·讨论 | 第91-92页 |
| ·小结 | 第92-94页 |
| 第五章 全文结论 | 第94-97页 |
| ·Bt Cry 杀虫基因的改构、表达及产物活性研究 | 第94-95页 |
| ·细胞器定位提高杀虫蛋白量的研究 | 第95页 |
| ·农杆菌介导喷花法转化棉花及转融合抗虫基因棉花的获得 | 第95-96页 |
| ·创新点 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 作者简介 | 第108页 |
