| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 目录 | 第13-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-42页 |
| 1. 规模化猪场粪污治理的研究进展 | 第19-24页 |
| ·国外规模化猪场粪污治理现状 | 第19-21页 |
| ·国内规模化猪场粪污治理现状 | 第21-22页 |
| ·四川省规模化猪场粪污治理现状 | 第22-24页 |
| ·减量化排放模式 | 第22-23页 |
| ·资源化利用模式 | 第23页 |
| ·工业化处理模式 | 第23页 |
| ·自然化养殖模式 | 第23-24页 |
| ·生态化循环模式 | 第24页 |
| 2. PCR-DGGE指纹图谱技术的研究进展 | 第24-31页 |
| ·PCR-DGGE技术基本原理 | 第25-26页 |
| ·DGGE技术的主要环节及优化 | 第26-28页 |
| ·样品总DNA提取 | 第26-27页 |
| ·样品16SrDNA片段的PCR扩增 | 第27页 |
| ·DGGE条件的优化 | 第27-28页 |
| ·割胶测序 | 第28页 |
| ·PCR-DGGE技术优缺点及对策 | 第28-29页 |
| ·PCR-DGGE技术在菌群多样性研究中的应用 | 第29-31页 |
| 3 养殖环境中细菌及其耐药性研究进展 | 第31-40页 |
| ·养殖粪污中的细菌研究进展 | 第31-32页 |
| ·细菌耐药性的产生机制 | 第32-34页 |
| ·细菌耐药性扩散的机制 | 第34-36页 |
| ·环境中细菌及其耐药性研究进展 | 第36-40页 |
| 4 存在问题及本研究的目的意义 | 第40-42页 |
| ·存在的问题 | 第40页 |
| ·本研究的目的意义 | 第40-42页 |
| 第二章 PCR-DGGE技术用于猪场粪污细菌群落分析的条件优化 | 第42-53页 |
| 摘要 | 第42页 |
| 引言 | 第42-43页 |
| 1 材料和方法 | 第43-46页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·猪场粪污样品 | 第43页 |
| ·猪鲜粪样品 | 第43页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-46页 |
| ·总DNA提取 | 第44-45页 |
| ·16S rDNA V3区扩增 | 第45页 |
| ·变性剂梯度的优化 | 第45页 |
| ·电泳时间的优化 | 第45页 |
| ·染色时间的优化 | 第45页 |
| ·猪场粪污样品的DGGE分析 | 第45-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-50页 |
| ·16S rDNA V3区扩增 | 第46-47页 |
| ·变性剂梯度的优化 | 第47页 |
| ·电泳时间的优化 | 第47页 |
| ·染色时间的优化 | 第47-48页 |
| ·猪场粪污样品DGGE分析结果 | 第48-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| ·DGGE方法的选择 | 第50-51页 |
| ·DGGE方法的优化 | 第51页 |
| ·DGGE方法对猪场粪污总DNA分析的验证 | 第51-52页 |
| 4 小结 | 第52-53页 |
| 第三章 猪场粪污细菌总DNA的细菌多样性PCR-DGGE分析 | 第53-73页 |
| 摘要 | 第53页 |
| 引言 | 第53-54页 |
| 1 材料和方法 | 第54-58页 |
| ·材料 | 第54-56页 |
| ·猪场粪污样品 | 第54-55页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第55-56页 |
| ·方法 | 第56-58页 |
| ·总DNA提取 | 第56页 |
| ·16S rDNA V3区扩增 | 第56-57页 |
| ·扩增产物的DGGE分析 | 第57页 |
| ·目的条带的回收及其序列鉴定分析 | 第57页 |
| ·数据分析 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-70页 |
| ·16S rDNA V3区扩增结果 | 第58-59页 |
| ·猪场粪污菌群的多样性比较 | 第59-70页 |
| ·猪场粪污菌群的DGGE图谱 | 第59-63页 |
| ·不同样品菌群的差异性 | 第63-65页 |
| ·不同样品菌群DGGE图谱的聚类分析 | 第65-67页 |
| ·香农指数、均匀性及丰度分析结果 | 第67-69页 |
| ·DGGE优势条带回收及鉴定结果 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| ·猪场粪污总DNA的DGGE分析 | 第70页 |
| ·猪场粪污中的细菌多样性 | 第70-72页 |
| ·猪场粪污总DNA DGGE分析的扩展 | 第72页 |
| 4 小结 | 第72-73页 |
| 第四章 猪场粪污细菌总DNA中菌群16S rDNA文库的构建 | 第73-83页 |
| 摘要 | 第73页 |
| 引言 | 第73-74页 |
| 1 材料和方法 | 第74-79页 |
| ·材料 | 第74页 |
| ·猪场粪污样品 | 第74页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第74页 |
| ·方法 | 第74-79页 |
| ·总DNA提取 | 第74-75页 |
| ·猪场粪污菌群16S rDNA文库的构建 | 第75-78页 |
| ·猪场粪污菌群16S rDNA文库的分析 | 第78-79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-82页 |
| ·16S rDNA基因的扩增 | 第79页 |
| ·猪场粪污菌群16S rDNA文库分析结果 | 第79-82页 |
| ·文库质量评价 | 第79页 |
| ·猪场粪污菌群16S rDNA基因文库筛选 | 第79-80页 |
| ·文库序列分析 | 第80页 |
| ·猪场粪污菌群的系统发育分析 | 第80-82页 |
| 3 讨论 | 第82页 |
| ·16S rDNA文库的应用 | 第82页 |
| ·利用猪场粪污总DNA构建16S rDNA文库 | 第82页 |
| 4 小结 | 第82-83页 |
| 第五章 猪场粪污细菌总DNA中的4类抗生素耐药基因调查 | 第83-103页 |
| 摘要 | 第83页 |
| 引言 | 第83-84页 |
| 1 材料和方法 | 第84-91页 |
| ·材料 | 第84-85页 |
| ·猪场粪污样品 | 第84页 |
| ·对照菌株 | 第84页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第84-85页 |
| ·方法 | 第85-91页 |
| ·总DNA提取 | 第85-86页 |
| ·猪场粪污细菌总DNA中氯霉素类药物耐药基因检测 | 第86-87页 |
| ·猪场粪污细菌总DNA中四环素类药物耐药基因检测 | 第87-88页 |
| ·猪场粪污细菌总DNA中磺胺类药物耐药基因检测 | 第88-89页 |
| ·猪场粪污细菌总DNA中氨基糖苷类药物耐药基因检测 | 第89-91页 |
| 2 结果与分析 | 第91-96页 |
| ·猪场粪污细菌总DNA中氯霉素类药物耐药基因检测结果 | 第91-92页 |
| ·猪场粪污细菌总DNA中四环素类药物耐药基因检测结果 | 第92-93页 |
| ·猪场粪污细菌总DNA中磺胺类药物耐药基因检测结果 | 第93-95页 |
| ·猪场粪污细菌总DNA中氨基糖苷类药物耐药基因检测结果 | 第95-96页 |
| 3 讨论 | 第96-102页 |
| ·养殖粪污中耐药基因检测情况 | 第96-98页 |
| ·养殖粪污中耐药基因检测方法 | 第98页 |
| ·4类常用抗生素的耐药基因检测 | 第98-102页 |
| 4 小结 | 第102-103页 |
| 第六章 猪场粪污中大肠杆菌和葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性研究 | 第103-122页 |
| 摘要 | 第103页 |
| 引言 | 第103-104页 |
| 1 材料和方法 | 第104-109页 |
| ·材料 | 第104-107页 |
| ·猪场粪污样品 | 第104-105页 |
| ·标准菌株 | 第105页 |
| ·药敏纸片 | 第105页 |
| ·培养基和试剂 | 第105-107页 |
| ·方法 | 第107-109页 |
| ·猪场粪污中大肠杆菌的分离鉴定及其耐药性检测 | 第107-108页 |
| ·猪场粪污中葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性检测 | 第108-109页 |
| 2 结果与分析 | 第109-119页 |
| ·猪场粪污中大肠杆菌的分离鉴定及其耐药性检测结果 | 第109-113页 |
| ·大肠杆菌分离鉴定结果 | 第109页 |
| ·大肠杆菌16S rDNA扩增验证 | 第109-110页 |
| ·大肠杆菌致病性实验结果 | 第110页 |
| ·大肠杆菌耐药表型检测结果 | 第110-111页 |
| ·大肠杆菌耐药基因型检测结果 | 第111-113页 |
| ·猪场粪污中葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性检测结果 | 第113-119页 |
| ·葡萄球菌分离鉴定结果 | 第113-114页 |
| ·葡萄球菌16S rDNA扩增验证 | 第114页 |
| ·葡萄球菌致病性实验结果 | 第114页 |
| ·葡萄球菌耐药表型检测结果 | 第114-116页 |
| ·葡萄球菌耐药基因型检测结果 | 第116-119页 |
| 3 讨论 | 第119-120页 |
| ·猪场粪污中大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究 | 第119页 |
| ·猪场粪污中葡萄球菌分离鉴定及耐药性研究 | 第119-120页 |
| 4 小结 | 第120-122页 |
| 全文总结 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-140页 |
| 致谢 | 第140-142页 |
| 学术成果及获得的奖励 | 第142页 |
