| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 研究背景 | 第12-20页 |
| 1.1.1 大肠癌及其研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1.2 锌指蛋白及其研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.3 ZER6研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2 本课题的提出及主要内容 | 第20-22页 |
| 1.2.1 本课题的提出及意义 | 第20页 |
| 1.2.2 本课题的主要内容 | 第20页 |
| 1.2.3 本课题的创新点 | 第20-22页 |
| 2 ZER6在结肠癌组织中的表达 | 第22-32页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.2.1 结肠癌及癌旁正常组织 | 第22-23页 |
| 2.2.2 主要仪器及耗材 | 第23-24页 |
| 2.2.3 主要药品及试剂 | 第24页 |
| 2.2.4 主要试剂的配置 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.3.1 结肠癌及癌旁正常组织ZER6 RNA表达水平检测 | 第25-27页 |
| 2.3.2 结肠癌及癌旁正常组织ZER6蛋白表达水平检测 | 第27-30页 |
| 2.4 实验结果 | 第30-31页 |
| 2.4.1 结肠癌及癌旁正常组织ZER6 RNA表达 | 第30页 |
| 2.4.2 结肠癌及癌旁正常组织ZER6蛋白表达 | 第30-31页 |
| 2.5 本章小结 | 第31-32页 |
| 3 ZER6对HCT116细胞增殖的影响 | 第32-42页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.2.1 主要仪器及设备 | 第32-33页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 3.2.3 敲减质粒 | 第34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-39页 |
| 3.3.1 细胞培养常用试剂配制 | 第34页 |
| 3.3.2 敲减质粒构建 | 第34-35页 |
| 3.3.3 质粒转染及嘌呤霉素筛选 | 第35-37页 |
| 3.3.4 TRizol裂解法提取RNA | 第37页 |
| 3.3.5 蛋白提取 | 第37页 |
| 3.3.6 CCK-8 细胞增殖检测 | 第37-38页 |
| 2.3.7 结晶紫染色 | 第38页 |
| 3.3.8 EdU染色 | 第38-39页 |
| 3.4 实验结果 | 第39-41页 |
| 3.4.1 敲减质粒抑制效果检测 | 第39页 |
| 3.4.2 ZER6敲低对HCT116细胞增殖的影响 | 第39-40页 |
| 3.4.3 ZER6敲低对HCT116细胞DNA合成的影响 | 第40-41页 |
| 3.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 4 ZER6对HCT116细胞周期的影响 | 第42-48页 |
| 4.1 引言 | 第42-43页 |
| 4.2 实验材料及仪器设备 | 第43页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.2.2 实验仪器及设备 | 第43页 |
| 4.2.3 实验药品及试剂 | 第43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-45页 |
| 4.3.1 干扰质粒制备 | 第43-44页 |
| 4.3.2 流式细胞术检测细胞周期 | 第44-45页 |
| 4.4 实验结果 | 第45-46页 |
| 4.4.1 ZER6敲低对HCT116细胞周期的影响 | 第45-46页 |
| 4.4.2 ZER6敲低对HCT116细胞周期蛋白的影响 | 第46页 |
| 4.5 本章小结 | 第46-48页 |
| 5 ZER6对P21的调控机制研究 | 第48-54页 |
| 5.1 引言 | 第48页 |
| 5.2 实验材料及设备 | 第48-49页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 5.2.2 实验仪器及设备 | 第49页 |
| 5.2.3 实验药品及试剂 | 第49页 |
| 5.3 实验方法 | 第49-50页 |
| 5.3.1 双荧光素酶报告基因系统检测 | 第49-50页 |
| 5.3.2 双敲低实验 | 第50页 |
| 5.4 实验结果： | 第50-52页 |
| 5.4.1 ZER6敲低对于p21转录活性的影响 | 第50-51页 |
| 5.4.2 ZER6敲低对于p21蛋白表达的影响 | 第51页 |
| 5.4.3 p21在ZER6对细胞周期素和增殖速率调控中所起的作用 | 第51-52页 |
| 5.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 6 ZER6两种异构体蛋白对HCT116细胞的作用 | 第54-64页 |
| 6.1 引言 | 第54-55页 |
| 6.2 实验材料及试剂 | 第55页 |
| 6.2.1 主要材料 | 第55页 |
| 6.2.2 主要试剂 | 第55页 |
| 6.3 实验过程 | 第55-57页 |
| 6.3.1 过表达质粒构建 | 第55-57页 |
| 6.3.2 HCT116细胞过表达实验 | 第57页 |
| 6.4 实验结果 | 第57-61页 |
| 6.4.1 敲减质粒抑制效果及特异性检测 | 第57-58页 |
| 6.4.2 ZER6两种异构体敲低对p21的影响 | 第58-59页 |
| 6.4.3 ZER6两种异构体过表达对p21的影响 | 第59-60页 |
| 6.4.4 p52-ZER6对细胞周期因子Cyclin D1和Cyclin E2的影响 | 第60-61页 |
| 6.4.5 p52-ZER6敲低对HCT116细胞增殖的影响 | 第61页 |
| 6.5 本章小结 | 第61-64页 |
| 7 结论与展望 | 第64-66页 |
| 7.1 主要结论 | 第64-65页 |
| 7.2 后续工作展望 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
