摘要 | 第6-7页 |
abstract | 第7-8页 |
英文缩略表 | 第15-16页 |
第一章 引言 | 第16-24页 |
1.1 小麦HMW-GS亚基鉴定和编码基因克隆 | 第16-18页 |
1.2 HMW-GS突变体培育及其在品质效应分析中的应用 | 第18-19页 |
1.3 利用遗传转化和微量配粉鉴定HMW-GS基因的功能 | 第19-20页 |
1.4 农杆菌介导的小麦遗传转化研究进展 | 第20-21页 |
1.5 无筛选标记转基因植株的研究进展 | 第21页 |
1.6 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
1.7 技术路线 | 第22-24页 |
第二章 无性系变异体AS208等小麦材料遗传转化体系建立 | 第24-42页 |
2.1 试验材料 | 第24-27页 |
2.1.1 植物材料 | 第24页 |
2.1.2 载体、酶及主要试剂 | 第24-27页 |
2.1.3 引物序列 | 第27页 |
2.2 试验方法 | 第27-31页 |
2.2.1 表达载体构建 | 第27-29页 |
2.2.2 表达载体转入农杆菌 | 第29-30页 |
2.2.3 农杆菌转化小麦幼胚 | 第30页 |
2.2.4 农杆菌转化小麦成熟胚 | 第30页 |
2.2.5 转基因植株检测 | 第30-31页 |
2.2.6 数据统计与分析 | 第31页 |
2.3 结果与分析 | 第31-40页 |
2.3.1 pWMB123载体构建 | 第31-33页 |
2.3.2 转GUS基因植株获得及检测 | 第33-35页 |
2.3.3 大面积推广小麦品种转基因体系建立 | 第35-37页 |
2.3.4 不同小麦F1杂种农杆菌转化效果分析 | 第37-38页 |
2.3.5 小麦成熟胚转基因植株的获得和检测 | 第38-40页 |
2.4 讨论 | 第40-42页 |
2.4.1 中国商业化小麦品种的遗传转化 | 第40页 |
2.4.2 提高难转化小麦品种转化效率的策略 | 第40-41页 |
2.4.3 农杆菌介导的小麦成熟胚转化 | 第41-42页 |
第三章 小麦无筛选标记转基因植株获得和筛选标记基因沉默现象分析 | 第42-55页 |
3.1 试验材料 | 第42页 |
3.1.1 植物材料 | 第42页 |
3.1.2 载体、酶及主要试剂 | 第42页 |
3.1.3 本章所用引物序列 | 第42页 |
3.2 试验方法 | 第42-45页 |
3.2.1 表达载体的构建 | 第42-43页 |
3.2.2 表达载体转入农杆菌 | 第43页 |
3.2.3 农杆菌转化小麦幼胚 | 第43页 |
3.2.4 转基因植株检测 | 第43-45页 |
3.3 结果与分析 | 第45-53页 |
3.3.1 T0代转pWMB123载体小麦植株获得和检测 | 第45-47页 |
3.3.2 T1代中无筛选标记转基因小麦植株获得和检测 | 第47-49页 |
3.3.3 T1代转基因植株中bar基因沉默分析 | 第49-51页 |
3.3.4 bar基因沉默植株中 35S启动子甲基化分析 | 第51-53页 |
3.4 讨论 | 第53-55页 |
3.4.1 提高无筛选标记转基因小麦植株获得率 | 第53-54页 |
3.4.2 转基因沉默原因分析 | 第54-55页 |
第四章 几个HMW-GS编码基因向AS208中的遗传转化 | 第55-68页 |
4.1 试验材料 | 第55-57页 |
4.1.1 植物材料 | 第55页 |
4.1.2 载体、酶及主要试剂 | 第55-56页 |
4.1.3 本章所用引物序列 | 第56-57页 |
4.2 试验方法 | 第57-60页 |
4.2.1 表达载体的构建 | 第57-58页 |
4.2.2 表达载体转入农杆菌 | 第58页 |
4.2.3 农杆菌转化小麦幼胚 | 第58-59页 |
4.2.4 转基因植株检测 | 第59-60页 |
4.3 结果与分析 | 第60-65页 |
4.3.1 HMW-GS亚基表达载体的构建 | 第60-62页 |
4.3.2 转HMW-GS基因小麦植株获得 | 第62-63页 |
4.3.3 转HMW-GS基因小麦植株初步检测 | 第63-64页 |
4.3.4 转HMW-GS基因小麦植株的SDS-PAGE分离鉴定 | 第64-65页 |
4.4 讨论 | 第65-68页 |
4.4.1 通过SDS-PAGE进行HMW-GS的分离 | 第65-66页 |
4.4.2 HMW-GS组成与面粉加工品质关系的分析 | 第66-67页 |
4.4.3 HMW-GS亚基功能鉴定方法 | 第67-68页 |
第五章 全文结论 | 第68-70页 |
1. 建立了获得无筛选标记转基因小麦植株的转化体系 | 第68页 |
2. 建立了优良小麦品系和大面积主推小麦品种稳定遗传转化体系 | 第68页 |
3. 利用易转化小麦品种(系)作为亲本之一配制杂交组合,提高了大面积推广小麦品种的转化效率 | 第68页 |
4. 将 1By8、1Bx20、1By20和 1Sx2.3 基因转入了小麦Glu-B1位点缺失系AS208,并检测到 1Sx2.3 基因在转基因植株中表达 | 第68-69页 |
5. 利用农杆菌转化小麦成熟胚获得了转基因植株 | 第69-70页 |
参考文献 | 第70-78页 |
致谢 | 第78-79页 |
作者简历 | 第79页 |