| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 表目录 | 第16-17页 |
| 图目录 | 第17-18页 |
| 缩略词表 | 第18-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-34页 |
| 1.1 稻瘟菌侵染机制 | 第20页 |
| 1.2 植物免疫反应机制 | 第20-24页 |
| 1.3 参与植物免疫反应的miRNA | 第24-32页 |
| 1.3.1 植物内源小分子RNA | 第24-25页 |
| 1.3.2 植物miRNA靶基因预测 | 第25-26页 |
| 1.3.3 miRNAs在PTI免疫反应中的作用 | 第26页 |
| 1.3.4 miRNAs在ETI免疫反应中的作用 | 第26-28页 |
| 1.3.5 miRNAs在水稻免疫反应中的作用 | 第28-29页 |
| 1.3.6 参与植物免疫反应的与小RNA路径相关的基因 | 第29-31页 |
| 1.3.7 miRNAs在植物与病原菌拮抗过程中的作用 | 第31-32页 |
| 1.4 转录组分析在研究植物免疫反应中的应用 | 第32-33页 |
| 1.5 目的与意义 | 第33-34页 |
| 第二章 OsDCL1-RNAi突变体表型及抗瘟性分析 | 第34-61页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-47页 |
| 2.1.1 供试植物 | 第35页 |
| 2.1.2 菌株及克隆载体 | 第35页 |
| 2.1.3 稻瘟菌分生孢子的准备、喷雾接种及抗性鉴定 | 第35页 |
| 2.1.4 RNA提取 | 第35-36页 |
| 2.1.5 cDNA第一链合成(TIANGENFastQuantcDNA第一链合成试剂盒） | 第36页 |
| 2.1.6 半定量PCR | 第36-37页 |
| 2.1.7 qRT-PCR | 第37-38页 |
| 2.1.8 stem-loop RT-PCR | 第38-39页 |
| 2.1.9 RNAi载体构建 | 第39-44页 |
| 2.1.9.1 总 RNA 提取(Tirzol 法） | 第39页 |
| 2.1.9.2 引物设计 | 第39-40页 |
| 2.1.9.3 胶回收(AxyPrep DNA Gel Extraction Kit) | 第40页 |
| 2.1.9.4 克隆反应体系的建立 | 第40页 |
| 2.1.9.5 大肠杆菌转化 | 第40-41页 |
| 2.1.9.6 抽提质粒(AxyPrep Plasmid Miniprep Kit) | 第41页 |
| 2.1.9.7 阳性重组子的鉴定 | 第41-42页 |
| 2.1.9.8 酶切、胶回收 | 第42页 |
| 2.1.9.9 pENTA-DCL1载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.1.9.10 LR反应 | 第43页 |
| 2.1.9.11 农杆菌转化 | 第43-44页 |
| 2.1.10 转基因植株的获得 | 第44-45页 |
| 2.1.10.1 诱导愈伤组织 | 第44页 |
| 2.1.10.2 继代 | 第44页 |
| 2.1.10.3 共培养 | 第44页 |
| 2.1.10.4 洗愈伤 | 第44页 |
| 2.1.10.5 分化 | 第44页 |
| 2.1.10.6 生根 | 第44-45页 |
| 2.1.11 病斑统计 | 第45页 |
| 2.1.12 点接种 | 第45页 |
| 2.1.13 植物基因组DNA提取(CTAB法） | 第45-46页 |
| 2.1.14 水稻叶鞘侵入分析 | 第46页 |
| 2.1.15 水稻叶賴 DAB(diaminobenzidine)染色 | 第46页 |
| 2.1.16 水稻叶鞘台盼蓝染色 | 第46-47页 |
| 2.2 结果与分析 | 第47-58页 |
| 2.2.1 OsDCLs基因的检测与表达 | 第47-49页 |
| 2.2.2 半定量RT-PCR | 第49-50页 |
| 2.2.3 Os-miRl62a受稻瘟菌侵染后的表达模式分析 | 第50页 |
| 2.2.4 OsDCL1-RNAi转基因植株的鉴定 | 第50-52页 |
| 2.2.5 OsDCL1-RNAi突变体中不同OsDCLs基因的表达 | 第52-53页 |
| 2.2.6 OsDCL1-RNAi突变体的表型分析 | 第53-54页 |
| 2.2.7 OsDCL1-RNAi突变体的抗瘟性鉴定 | 第54-55页 |
| 2.2.8 菌丝侵染实验 | 第55-56页 |
| 2.2.9 细胞死亡实验 | 第56-57页 |
| 2.2.10 OsDCL1基因的沉默激活一些抗病基因的组成型表达 | 第57-58页 |
| 2.3 讨论 | 第58-61页 |
| 第三章 OsDCL1-RNAi转录组和差异基因的分析 | 第61-75页 |
| 3.1 材料与方法 | 第62页 |
| 3.1.1 供试材料 | 第62页 |
| 3.1.2 载体及菌株 | 第62页 |
| 3.1.3 转录组测序和分析 | 第62页 |
| 3.1.4 qRT-PCR验证 | 第62页 |
| 3.2 结果与分析 | 第62-72页 |
| 3.2.1 OsDCL1-RNAi突变体在接种稻瘟菌前后转录组水平的变化 | 第62-63页 |
| 3.2.2 DEGs功能富集分析和抗病相关基因表达分析 | 第63-67页 |
| 3.2.3 JA和SA信号通路相关基因 | 第67-68页 |
| 3.2.4 qRT-PCR验证和分析参与稻瘟菌免疫反应基因 | 第68-71页 |
| 3.2.5 5个差异表达基因过表达载体的构建 | 第71-72页 |
| 3.3 讨论 | 第72-75页 |
| 第四章 DCL1沉默突变体接种稻瘟菌前后小分子RNA和基因表达谱差异分析 | 第75-85页 |
| 4.1 材料与方法 | 第76-78页 |
| 4.1.1 供试植物 | 第76页 |
| 4.1.2 载体及菌株 | 第76页 |
| 4.1.3 miRNA测序及分析 | 第76页 |
| 4.1.4 茎环式RT-PCR | 第76-77页 |
| 4.1.5 miRNA海绵设计及序列合成 | 第77-78页 |
| 4.2 结果与分析 | 第78-83页 |
| 4.2.1 受稻瘟菌诱导表达的miRNA | 第78-80页 |
| 4.2.2 miRNA159a.l/b的表型分析及抗病性鉴定 | 第80-83页 |
| 4.3 讨论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-103页 |
| 附表 | 第103-107页 |
| 附录Ⅰ | 第107-114页 |
| 附录II | 第114-115页 |
| 作者简历 | 第115页 |
