| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文缩略词(ABBREVTATION) | 第12-19页 |
| 1 绪论 | 第19-45页 |
| 1.1 灵芝 | 第19-28页 |
| 1.1.1 灵芝的分类和药用价值 | 第19页 |
| 1.1.2 灵芝三萜类化合物种类及结构特点 | 第19-22页 |
| 1.1.3 灵芝三萜药理活性 | 第22-25页 |
| 1.1.4 灵芝三萜化合物质谱裂解方式 | 第25页 |
| 1.1.5 灵芝三萜类化合物提取分离及纯化 | 第25-28页 |
| 1.2 大豆异黄酮 | 第28-43页 |
| 1.2.1 大豆异黄酮的结构、组成 | 第28-30页 |
| 1.2.2 大豆异黄酮苷元的制备 | 第30-34页 |
| 1.2.3 大豆异黄酮的生理功能 | 第34-37页 |
| 1.2.4 大豆异黄酮抗癌机理 | 第37-43页 |
| 1.3 本课题立题依据及研究内容 | 第43-45页 |
| 1.3.1 立题依据及研究目的 | 第43-44页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第44-45页 |
| 2 高产三萜灵芝菌株筛选、鉴定及培养 | 第45-65页 |
| 2.1 材料 | 第45-47页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第45页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 2.1.3 培养基与溶液配制 | 第45-46页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第46-47页 |
| 2.2 方法 | 第47-49页 |
| 2.2.1 灵芝菌株液体发酵培养方法 | 第47页 |
| 2.2.2 菌丝生物量(Mycelia Biomass)的测定 | 第47页 |
| 2.2.3 灵芝菌株液体发酵过程中三萜产量的测定 | 第47-48页 |
| 2.2.4 灵芝菌株液体发酵过程中多糖产量的测定 | 第48页 |
| 2.2.5 CTAB法提取灵芝菌丝DNA | 第48-49页 |
| 2.2.6 菌种鉴定 | 第49页 |
| 2.2.7 统计分析 | 第49页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第49-63页 |
| 2.3.1 高产活性物质灵芝菌株的筛选 | 第49-50页 |
| 2.3.2 灵芝菌株液体发酵过程中生物活性成分变化 | 第50-52页 |
| 2.3.3 美国灵芝菌种鉴定 | 第52-53页 |
| 2.3.4 美国灵芝液体发酵培养基优化 | 第53-60页 |
| 2.3.5 不同发酵条件对灵芝液体发酵的影响 | 第60-63页 |
| 2.4 本章小结 | 第63-65页 |
| 3 HPLC-ESI-MS鉴定灵芝菌丝中灵芝酸成分 | 第65-78页 |
| 3.1 材料 | 第65-66页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第65页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第65页 |
| 3.1.3 培养基及溶液配制 | 第65-66页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第66页 |
| 3.2 方法 | 第66-68页 |
| 3.2.1 灵芝菌株液体发酵培养方法 | 第66-67页 |
| 3.2.2 干菌丝制备 | 第67页 |
| 3.2.3 灵芝酸样品制备 | 第67页 |
| 3.2.4 HPLC检测灵芝酸 | 第67页 |
| 3.2.5 HPLC-ESI-MS检测灵芝酸 | 第67-68页 |
| 3.2.6 统计分析 | 第68页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第68-76页 |
| 3.3.1 HPLC-ESI-MS鉴定灵芝菌丝中灵芝酸成分 | 第68-74页 |
| 3.3.2 灵芝菌丝中含N量及氨基酸含量测定 | 第74-75页 |
| 3.3.3 灵芝菌丝中微量元素的测定 | 第75-76页 |
| 3.4 本章小结 | 第76-78页 |
| 4 灵芝转化大豆异黄酮及其转化产物抗氧化能力的研究 | 第78-95页 |
| 4.1 材料 | 第78-80页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第78页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第78-79页 |
| 4.1.3 培养基配制 | 第79页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第79-80页 |
| 4.2 方法 | 第80-83页 |
| 4.2.1 灵芝菌株液体发酵培养方法 | 第80页 |
| 4.2.2 β-葡萄糖苷酶活力测定 | 第80页 |
| 4.2.3 灵芝转化大豆异黄酮 | 第80-81页 |
| 4.2.4 灵芝菌丝转化大豆异黄酮后其转化产物抗氧化能力的研究 | 第81-83页 |
| 4.2.5 统计分析 | 第83页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第83-93页 |
| 4.3.1 灵芝菌丝液体发酵过程中发酵液β-葡萄糖苷酶酶活变化 | 第83-84页 |
| 4.3.2 灵芝转化大豆异黄酮工艺研究 | 第84-90页 |
| 4.3.3 灵芝转化大豆异黄酮产物抗氧化能力研究 | 第90-93页 |
| 4.4 本章小结 | 第93-95页 |
| 5 灵芝转化大豆异黄酮产物抗肿瘤活性研究 | 第95-113页 |
| 5.1 材料 | 第95-97页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第95页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第95-96页 |
| 5.1.3 培养基及试剂配制 | 第96页 |
| 5.1.4 主要仪器设备 | 第96-97页 |
| 5.2 方法 | 第97-99页 |
| 5.2.1 灵芝菌株液体发酵培养方法 | 第97页 |
| 5.2.2 灵芝转化大豆异黄酮及转化产物提取 | 第97页 |
| 5.2.3 细胞培养 | 第97-98页 |
| 5.2.4 MTT法测定癌细胞存活率 | 第98页 |
| 5.2.5 细胞周期分布的测定 | 第98页 |
| 5.2.6 Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测 | 第98-99页 |
| 5.2.7 激光共聚焦显微镜观察细胞形态 | 第99页 |
| 5.2.8 统计分析 | 第99页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第99-111页 |
| 5.3.1 灵芝转化大豆异黄酮产物对癌细胞存活率的影响 | 第99-101页 |
| 5.3.2 灵芝转化大豆异黄酮产物对细胞凋亡的影响 | 第101-105页 |
| 5.3.3 灵芝转化大豆异黄酮产物对细胞周期分布的影响 | 第105-109页 |
| 5.3.4 荧光条件下观察HTL9细胞凋亡情况 | 第109-111页 |
| 5.4 本章小结 | 第111-113页 |
| 6 灵芝转化大豆异黄酮产物抗肿瘤机理初步研究 | 第113-128页 |
| 6.1 材料 | 第113-115页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第113页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第113-114页 |
| 6.1.3 培养基及试剂配制 | 第114页 |
| 6.1.4 主要仪器设备 | 第114-115页 |
| 6.2 方法 | 第115-121页 |
| 6.2.1 灵芝菌株液体发酵培养方法 | 第115页 |
| 6.2.2 灵芝转化大豆异黄酮及转化产物提取 | 第115-116页 |
| 6.2.3 细胞培养 | 第116页 |
| 6.2.4 Western Blot检测细胞色素C(Cyto-C)、NF-κB(P65) | 第116-118页 |
| 6.2.5 RT-PCR分析 | 第118-121页 |
| 6.2.6 统计分析 | 第121页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第121-126页 |
| 6.3.1 TSI对HTL9细胞Cyto-C、NF-κB蛋白表达的影响 | 第121-123页 |
| 6.3.2 TSI对HTL9细胞凋亡相关基因表达的影响 | 第123-126页 |
| 6.4 本章小结 | 第126-128页 |
| 7 结论与展望 | 第128-131页 |
| 7.1 本论文的主要结论 | 第128-130页 |
| 7.2 后续研究展望 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-144页 |
| 附：作者简历 | 第144页 |
