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基于液体发酵的高三萜灵芝菌生物转化大豆异黄酮及其抑制肿瘤活性研究

致谢第6-7页
摘要第7-9页
Abstract第9-11页
英文缩略词(ABBREVTATION)第12-19页
1 绪论第19-45页
    1.1 灵芝第19-28页
        1.1.1 灵芝的分类和药用价值第19页
        1.1.2 灵芝三萜类化合物种类及结构特点第19-22页
        1.1.3 灵芝三萜药理活性第22-25页
        1.1.4 灵芝三萜化合物质谱裂解方式第25页
        1.1.5 灵芝三萜类化合物提取分离及纯化第25-28页
    1.2 大豆异黄酮第28-43页
        1.2.1 大豆异黄酮的结构、组成第28-30页
        1.2.2 大豆异黄酮苷元的制备第30-34页
        1.2.3 大豆异黄酮的生理功能第34-37页
        1.2.4 大豆异黄酮抗癌机理第37-43页
    1.3 本课题立题依据及研究内容第43-45页
        1.3.1 立题依据及研究目的第43-44页
        1.3.2 研究内容第44-45页
2 高产三萜灵芝菌株筛选、鉴定及培养第45-65页
    2.1 材料第45-47页
        2.1.1 实验菌株第45页
        2.1.2 主要试剂第45页
        2.1.3 培养基与溶液配制第45-46页
        2.1.4 主要仪器设备第46-47页
    2.2 方法第47-49页
        2.2.1 灵芝菌株液体发酵培养方法第47页
        2.2.2 菌丝生物量(Mycelia Biomass)的测定第47页
        2.2.3 灵芝菌株液体发酵过程中三萜产量的测定第47-48页
        2.2.4 灵芝菌株液体发酵过程中多糖产量的测定第48页
        2.2.5 CTAB法提取灵芝菌丝DNA第48-49页
        2.2.6 菌种鉴定第49页
        2.2.7 统计分析第49页
    2.3 结果与讨论第49-63页
        2.3.1 高产活性物质灵芝菌株的筛选第49-50页
        2.3.2 灵芝菌株液体发酵过程中生物活性成分变化第50-52页
        2.3.3 美国灵芝菌种鉴定第52-53页
        2.3.4 美国灵芝液体发酵培养基优化第53-60页
        2.3.5 不同发酵条件对灵芝液体发酵的影响第60-63页
    2.4 本章小结第63-65页
3 HPLC-ESI-MS鉴定灵芝菌丝中灵芝酸成分第65-78页
    3.1 材料第65-66页
        3.1.1 实验材料第65页
        3.1.2 主要试剂第65页
        3.1.3 培养基及溶液配制第65-66页
        3.1.4 主要仪器设备第66页
    3.2 方法第66-68页
        3.2.1 灵芝菌株液体发酵培养方法第66-67页
        3.2.2 干菌丝制备第67页
        3.2.3 灵芝酸样品制备第67页
        3.2.4 HPLC检测灵芝酸第67页
        3.2.5 HPLC-ESI-MS检测灵芝酸第67-68页
        3.2.6 统计分析第68页
    3.3 结果与讨论第68-76页
        3.3.1 HPLC-ESI-MS鉴定灵芝菌丝中灵芝酸成分第68-74页
        3.3.2 灵芝菌丝中含N量及氨基酸含量测定第74-75页
        3.3.3 灵芝菌丝中微量元素的测定第75-76页
    3.4 本章小结第76-78页
4 灵芝转化大豆异黄酮及其转化产物抗氧化能力的研究第78-95页
    4.1 材料第78-80页
        4.1.1 实验材料第78页
        4.1.2 主要试剂第78-79页
        4.1.3 培养基配制第79页
        4.1.4 主要仪器设备第79-80页
    4.2 方法第80-83页
        4.2.1 灵芝菌株液体发酵培养方法第80页
        4.2.2 β-葡萄糖苷酶活力测定第80页
        4.2.3 灵芝转化大豆异黄酮第80-81页
        4.2.4 灵芝菌丝转化大豆异黄酮后其转化产物抗氧化能力的研究第81-83页
        4.2.5 统计分析第83页
    4.3 结果与讨论第83-93页
        4.3.1 灵芝菌丝液体发酵过程中发酵液β-葡萄糖苷酶酶活变化第83-84页
        4.3.2 灵芝转化大豆异黄酮工艺研究第84-90页
        4.3.3 灵芝转化大豆异黄酮产物抗氧化能力研究第90-93页
    4.4 本章小结第93-95页
5 灵芝转化大豆异黄酮产物抗肿瘤活性研究第95-113页
    5.1 材料第95-97页
        5.1.1 实验材料第95页
        5.1.2 主要试剂第95-96页
        5.1.3 培养基及试剂配制第96页
        5.1.4 主要仪器设备第96-97页
    5.2 方法第97-99页
        5.2.1 灵芝菌株液体发酵培养方法第97页
        5.2.2 灵芝转化大豆异黄酮及转化产物提取第97页
        5.2.3 细胞培养第97-98页
        5.2.4 MTT法测定癌细胞存活率第98页
        5.2.5 细胞周期分布的测定第98页
        5.2.6 Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测第98-99页
        5.2.7 激光共聚焦显微镜观察细胞形态第99页
        5.2.8 统计分析第99页
    5.3 结果与讨论第99-111页
        5.3.1 灵芝转化大豆异黄酮产物对癌细胞存活率的影响第99-101页
        5.3.2 灵芝转化大豆异黄酮产物对细胞凋亡的影响第101-105页
        5.3.3 灵芝转化大豆异黄酮产物对细胞周期分布的影响第105-109页
        5.3.4 荧光条件下观察HTL9细胞凋亡情况第109-111页
    5.4 本章小结第111-113页
6 灵芝转化大豆异黄酮产物抗肿瘤机理初步研究第113-128页
    6.1 材料第113-115页
        6.1.1 实验材料第113页
        6.1.2 主要试剂第113-114页
        6.1.3 培养基及试剂配制第114页
        6.1.4 主要仪器设备第114-115页
    6.2 方法第115-121页
        6.2.1 灵芝菌株液体发酵培养方法第115页
        6.2.2 灵芝转化大豆异黄酮及转化产物提取第115-116页
        6.2.3 细胞培养第116页
        6.2.4 Western Blot检测细胞色素C(Cyto-C)、NF-κB(P65)第116-118页
        6.2.5 RT-PCR分析第118-121页
        6.2.6 统计分析第121页
    6.3 结果与讨论第121-126页
        6.3.1 TSI对HTL9细胞Cyto-C、NF-κB蛋白表达的影响第121-123页
        6.3.2 TSI对HTL9细胞凋亡相关基因表达的影响第123-126页
    6.4 本章小结第126-128页
7 结论与展望第128-131页
    7.1 本论文的主要结论第128-130页
    7.2 后续研究展望第130-131页
参考文献第131-144页
附:作者简历第144页

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