| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-41页 |
| 1.1 Red/ET重组工程 | 第12-30页 |
| 1.1.1 Red/ET重组工程简介 | 第12-14页 |
| 1.1.2 Red/ET重组的原理 | 第14-18页 |
| 1.1.3 可诱导启动子 | 第18-21页 |
| 1.1.4 温度敏感型质粒 | 第21-22页 |
| 1.1.5 Red/ET重组工程的操作步骤 | 第22-24页 |
| 1.1.6 Red/ET重组工程的应用 | 第24-30页 |
| 1.2 ccd毒素-抗毒素系统 | 第30-34页 |
| 1.2.1 毒素-抗毒素系统 | 第30-31页 |
| 1.2.2 ccd毒素-抗毒素系统 | 第31-33页 |
| 1.2.3 ccd操纵子的调控 | 第33-34页 |
| 1.3 非核糖体多肽合成酶 | 第34-37页 |
| 1.4 刺糖多孢菌和多杀菌素 | 第37-40页 |
| 1.5 立题依据和意义 | 第40-41页 |
| 第二章 DNA直接克隆的优化 | 第41-69页 |
| 2.1 研究背景 | 第41-45页 |
| 2.2 材料和方法 | 第45-57页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第45-49页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 2.2.3 pSC101-RhaB-ETgA质粒的构建 | 第52-54页 |
| 2.2.4 pSC101-tetO-ETgA质粒的构建 | 第54-55页 |
| 2.2.5 pSC101-cI-ETgA质粒的构建 | 第55-56页 |
| 2.2.6 “线性-线性”重组效率比较 | 第56-57页 |
| 2.3 结果与分析 | 第57-64页 |
| 2.3.1 RecE/RecT表达质粒的构建 | 第57-61页 |
| 2.3.2 “线性-线性”重组效率比较 | 第61-62页 |
| 2.3.3 提高直接克隆效率的策略 | 第62-64页 |
| 2.4 讨论 | 第64-69页 |
| 2.4.1 直接克隆与沉默基因簇资源的挖掘 | 第65-66页 |
| 2.4.2 直接克隆中需要注意的问题 | 第66-67页 |
| 2.4.3 三元重组技术 | 第67-69页 |
| 第三章 ccdB反向筛选在Red/ET重组工程中的应用 | 第69-119页 |
| 3.1 研究背景 | 第69-75页 |
| 3.1.1 反向筛选和Red/ET重组工程 | 第69-72页 |
| 3.1.2 利用ccdB作反向筛选标记基因 | 第72-75页 |
| 3.2 材料和方法 | 第75-94页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第75-79页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第79页 |
| 3.2.3 质粒p15A-ccdB-amp的构建 | 第79-80页 |
| 3.2.4 质粒p15A-ccdB-cm和p15A-ccdB-hyg的构建 | 第80-82页 |
| 3.2.5 高效重组的CcdB抗性E coli菌株 | 第82-85页 |
| 3.2.6 利用ccdB反向筛选修饰多拷贝质粒 | 第85-87页 |
| 3.2.7 利用ccdB反向筛选修饰BAC | 第87-94页 |
| 3.3 结果及分析 | 第94-115页 |
| 3.3.1 质粒p15A-ccdB-amp(cm,hyg) | 第94-97页 |
| 3.3.2 高效重组的CcdB抗性E.coli菌株 | 第97-99页 |
| 3.3.3 利用ccdB反向筛选修饰多拷贝质粒 | 第99-105页 |
| 3.3.4 利用ccdB反向筛选修饰BAC | 第105-115页 |
| 3.4 讨论 | 第115-119页 |
| 3.4.1 ccdB反向筛选系统的优越性 | 第115-116页 |
| 3.4.2 提高ssDNA诱变效率的措施 | 第116-117页 |
| 3.4.3 RecE/RecT介导的多个片段的重组 | 第117-118页 |
| 3.4.4 反向筛选和Red/ET重组与代谢工程 | 第118-119页 |
| 第四章 刺糖多孢菌遗传修饰方法研究 | 第119-128页 |
| 4.1 研究背景 | 第119-120页 |
| 4.1.1 刺糖多孢菌的遗传修饰研究进展 | 第119-120页 |
| 4.2 材料和方法 | 第120-125页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第120-123页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第123页 |
| 4.2.3 p15A-ermE-Tps质粒的构建 | 第123-124页 |
| 4.2.4 接合转移 | 第124-125页 |
| 4.2.5 接合子的PCR鉴定 | 第125页 |
| 4.3 结果与分析 | 第125-127页 |
| 4.3.1 mariner转座子整合到S.spinosa染色体上 | 第125-127页 |
| 4.4 讨论 | 第127-128页 |
| 第五章 研究结论与展望 | 第128-130页 |
| 5.1 直接克隆 | 第128页 |
| 5.2 ccdB反向筛选与Red/ET重组 | 第128-129页 |
| 5.3 刺糖多孢菌遗传修饰方法 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-143页 |
| 论文发表情况 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
| 本论文感谢以下基金项目的资助 | 第145-146页 |
