| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-26页 |
| 1.1 立题背景及意义 | 第10-11页 |
| 1.2 阪崎肠杆菌简介 | 第11-14页 |
| 1.2.1 阪崎肠杆菌的生物学特性 | 第11-12页 |
| 1.2.2 阪崎肠杆菌致病性及致病机制 | 第12-14页 |
| 1.2.3 阪崎肠杆菌的流行病学及控制 | 第14页 |
| 1.3 阪崎肠杆菌检测方法的研究 | 第14-21页 |
| 1.3.1 传统的分离鉴定方法 | 第15-17页 |
| 1.3.2 分子生物学检测方法 | 第17-20页 |
| 1.3.3 其他检测方法 | 第20-21页 |
| 1.4 实时荧光环介导等温扩增（RF-LAMP）技术 | 第21-25页 |
| 1.4.1 RF-LAMP 法的概述 | 第21-22页 |
| 1.4.2 RF-LAMP 法的原理 | 第22-23页 |
| 1.4.3 RF-LAMP 法的特点 | 第23-24页 |
| 1.4.4 荧光染料 SYBRGreenI | 第24页 |
| 1.4.5 恒温扩增实时荧光检测系统 DEAOU ARTⅡ | 第24-25页 |
| 1.5 研究内容 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 试验所用菌株 | 第26-27页 |
| 2.1.2 仪器与设备 | 第27页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第27页 |
| 2.1.4 样品与生化试剂 | 第27-28页 |
| 2.2 试验方法 | 第28-29页 |
| 2.2.1 菌种的培养 | 第28页 |
| 2.2.2 细菌 DNA 模板的提取 | 第28-29页 |
| 2.3 RF-LAMP 引物设计、反应体系和主要操作程序 | 第29-30页 |
| 2.3.1 RF-LAMP 反应引物设计 | 第29-30页 |
| 2.3.2 RF-LAMP 反应体系和主要操作程序 | 第30页 |
| 2.3.3 PCR 反应体系和主要操作程序 | 第30页 |
| 2.4 RF-LAMP 反应条件优化 | 第30-31页 |
| 2.4.1 适宜 Mg2+浓度选择 | 第30-31页 |
| 2.4.2 dNTPs 浓度优化 | 第31页 |
| 2.4.3 反应温度的优化 | 第31页 |
| 2.4.4 BstDNA 聚合酶添加量的优化 | 第31页 |
| 2.4.5 引物对 RF-LAMP 反应的影响 | 第31页 |
| 2.4.6 荧光染料对 RF-LAMP 反应的影响 | 第31页 |
| 2.5 RF-LAMP 扩增产物的结果分析 | 第31-32页 |
| 2.5.1 RF-LAMP 扩增产物的实时荧光曲线分析 | 第31-32页 |
| 2.5.2 RF-LAMP 扩增产物凝胶成像分析 | 第32页 |
| 2.5.3 RF-LAMP 扩增产物酶切结果分析 | 第32页 |
| 2.5.4 RF-LAMP 扩增产物的熔解曲线分析 | 第32页 |
| 2.6 引物特异性的检测 | 第32-33页 |
| 2.6.1 RF-LAMP 引物特异性研究 | 第32页 |
| 2.6.2 PCR 引物特异性研究 | 第32-33页 |
| 2.7 阪崎肠杆菌纯培养物的灵敏度检测 | 第33页 |
| 2.7.1 RF-LAMP 反应的灵敏度检测 | 第33页 |
| 2.7.2 PCR 反应的灵敏度检测 | 第33页 |
| 2.8 人工污染奶粉中阪崎肠杆菌基因组 DNA 提取方法的比较 | 第33-35页 |
| 2.8.1 普通热裂解法 | 第33-34页 |
| 2.8.2 蛋白酶 K 法 | 第34页 |
| 2.8.3 化学试剂法 | 第34页 |
| 2.8.4 试剂盒法 | 第34-35页 |
| 2.9 人工污染奶粉中阪崎肠杆菌的检出限试验 | 第35-36页 |
| 2.9.1 人工污染奶粉阪崎肠杆菌及基因组 DNA 的制备 | 第35页 |
| 2.9.2 RF-LAMP 法检测人工污染阪崎肠杆菌样品的检出限 | 第35页 |
| 2.9.3 PCR 法检测人工污染阪崎肠杆菌样品的检出限 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-50页 |
| 3.1 RF-LAMP 反应条件的优化 | 第36-42页 |
| 3.1.1 Mg2+浓度的优化 | 第36页 |
| 3.1.2 dNTPs 浓度优化 | 第36-37页 |
| 3.1.3 反应温度的优化 | 第37-39页 |
| 3.1.4 BstDNA 聚合酶添加量的优化 | 第39-40页 |
| 3.1.5 引物对 RF-LAMP 反应的影响 | 第40-41页 |
| 3.1.6 荧光染料对 RF-LAMP 反应的影响 | 第41-42页 |
| 3.2 RF-LAMP 扩增产物的分析 | 第42-44页 |
| 3.2.1 RF-LAMP 扩增产物的实时荧光曲线分析 | 第42-43页 |
| 3.2.2 RF-LAMP 扩增产物的凝胶成像分析 | 第43页 |
| 3.2.3 RF-LAMP 扩增产物的熔解曲线分析 | 第43-44页 |
| 3.2.4 LAMP 扩增产物酶切结果分析 | 第44页 |
| 3.3 引物特异性的研究 | 第44-47页 |
| 3.3.1 RF-LAMP 引物特异性研究 | 第44-46页 |
| 3.3.2 PCR 引物特异性研究 | 第46-47页 |
| 3.4 阪崎肠杆菌纯培养灵敏度的研究 | 第47-48页 |
| 3.5 人工污染奶粉中阪崎肠杆菌基因组 DNA 提取的方法比较 | 第48页 |
| 3.6 人工污染奶粉中阪崎肠杆菌的检出限 | 第48-50页 |
| 3.6.1 RF-LAMP 检测人工污染奶粉样品中阪崎肠杆菌的检出限 | 第48-49页 |
| 3.6.2 PCR 检测人工污染奶粉样品中阪崎肠杆菌的检出限 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 实时荧光环介导等温扩增技术（RF-LAMP）检测阪崎肠杆菌的方法学评价 | 第50页 |
| 4.2 靶基因的确定 | 第50-51页 |
| 4.3 RF-LAMP 引物的设计 | 第51页 |
| 4.4 DNA 聚合酶 | 第51-52页 |
| 4.5 RF-LAMP 反应体系的优化 | 第52页 |
| 4.6 熔解曲线的应用 | 第52页 |
| 4.7 RF-LAMP 反应的污染防控 | 第52-53页 |
| 4.8 RF-LAMP 检测阪崎肠杆菌的展望 | 第53-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 攻读学位论文期间发表论文情况 | 第61-63页 |
| 作者简介 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
