| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-7页 |
| 英文缩写词或符号表 | 第8-16页 |
| 第1章 前言 | 第16-36页 |
| 1.1 研究背景 | 第16-34页 |
| 1.1.1 骨骼肌的结构和发育过程 | 第16-20页 |
| 1.1.1.1 骨骼肌的结构和成分 | 第16-17页 |
| 1.1.1.2 骨骼肌的发育过程和肌纤维的分类 | 第17-18页 |
| 1.1.1.3 成肌细胞向肌管分化的过程 | 第18-20页 |
| 1.1.2 性连锁矮小鸡在骨骼肌发育研究中的应用 | 第20-21页 |
| 1.1.3 micro RNA对骨骼肌分化的调控 | 第21-30页 |
| 1.1.3.1 mi RNA在骨骼肌分化中的表达模式 | 第22-23页 |
| 1.1.3.2 Myomi Rs在骨骼肌分化中的作用 | 第23-29页 |
| 1.1.3.3 骨骼肌分化中mi RNAs与MRF和MEF2家族间的互作 | 第29-30页 |
| 1.1.4 Myomaker促进成肌细胞融合 | 第30-31页 |
| 1.1.5 c-Myc在细胞生长发育中的作用 | 第31-34页 |
| 1.1.5.1 c-Myc对细胞生长发育的调控 | 第31-32页 |
| 1.1.5.2 c-Myc对肌肉发育的调控 | 第32-33页 |
| 1.1.5.3 c-Myc对mi RNAs的转录调控 | 第33-34页 |
| 1.2 研究目的及意义 | 第34-35页 |
| 1.3 研究技术路线 | 第35-36页 |
| 第2章 mi RNA-m RNA联合分析寻找出与鸡肌肉发育相关的关键分子和通路 | 第36-56页 |
| 2.1 引言 | 第36页 |
| 2.2 材料与方法 | 第36-40页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 2.2.1.1 实验用组织样本 | 第36-37页 |
| 2.2.1.2 主要仪器设备 | 第37页 |
| 2.2.1.3 主要试剂 | 第37页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第37-40页 |
| 2.2.2.1 组织蛋白抽提和定量 | 第37-38页 |
| 2.2.2.2 RNA抽提和mi RNA的RT-q PCR | 第38页 |
| 2.2.2.3 Western blot | 第38页 |
| 2.2.2.4 电镜样品制作及观察 | 第38页 |
| 2.2.2.5 光镜样品制作及观察 | 第38页 |
| 2.2.2.6 组织学特性指标的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.2.7 芯片数据分析 | 第39页 |
| 2.2.2.8 GO和mi RNAs靶标通路分析 | 第39页 |
| 2.2.2.9 mi RNA-m RNA互作网络分析 | 第39-40页 |
| 2.3 结果与分析 | 第40-55页 |
| 2.3.1 SLD鸡和正常鸡的肌纤维特性和差异 | 第40-42页 |
| 2.3.2 SLD鸡和正常鸡之间的差异表达基因和mi RNAs | 第42-44页 |
| 2.3.3 7 周龄DEGs和DEMs的网络和功能性分析 | 第44-48页 |
| 2.3.4 7 周龄和14胚龄间的差异表达基因和mi RNAs | 第48-49页 |
| 2.3.5 品种特异性时期差异表达基因和mi RNAs的功能和网络分析 | 第49-51页 |
| 2.3.6 品种间共同时期差异表达基因和mi RNAs的功能和网络分析 | 第51-55页 |
| 2.4 小结 | 第55-56页 |
| 第3章 mi R-203 介导的调控通路抑制鸡成肌细胞增殖和分化 | 第56-87页 |
| 3.1 引言 | 第56页 |
| 3.2 材料与方法 | 第56-65页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第56-58页 |
| 3.2.1.1 实验用动物和细胞 | 第56页 |
| 3.2.1.2 主要仪器设备 | 第56-57页 |
| 3.2.1.3 主要试剂 | 第57-58页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第58-65页 |
| 3.2.2.1 DF-1 细胞培养和传代 | 第58页 |
| 3.2.2.2 鸡原代成肌细胞分离、纯化、鉴定和传代 | 第58-59页 |
| 3.2.2.3 核酸和蛋白提取 | 第59页 |
| 3.2.2.4 细胞增殖检测 | 第59-60页 |
| 3.2.2.5 腿肌组织切片制作和H&E染色 | 第60页 |
| 3.2.2.6 c DNA末端快速扩增试验 | 第60-61页 |
| 3.2.2.7 性别鉴定和基因定量检测 | 第61页 |
| 3.2.2.8 引物设计 | 第61-63页 |
| 3.2.2.9 质粒构建 | 第63页 |
| 3.2.2.10 mi RNA靶标验证试验 | 第63-64页 |
| 3.2.2.11 免疫荧光 | 第64页 |
| 3.2.2.12 Western blot | 第64页 |
| 3.2.2.13 mi RNA反转录和定量分析 | 第64页 |
| 3.2.2.14 mi RNA Northern blot | 第64页 |
| 3.2.2.15 mi RNA原位杂交 | 第64页 |
| 3.2.2.16 数据统计与分析 | 第64-65页 |
| 3.3 结果与分析 | 第65-86页 |
| 3.3.1 mi R-203 的表达与鸡胚骨骼肌发育的联系 | 第65-66页 |
| 3.3.2 鸡胚骨骼肌发育期间的肌纤维组织学特性变化 | 第66-68页 |
| 3.3.3 mi R-203 在成肌细胞增殖期和分化期的表达 | 第68-69页 |
| 3.3.4 mi R-203 抑制成肌细胞增殖和分化 | 第69-74页 |
| 3.3.5 c-JUN是mi R-203 抑制成肌细胞增殖的关键靶基因 | 第74-77页 |
| 3.3.6 mi R-203 通过靶向抑制MEF2C调控成肌细胞分化 | 第77-81页 |
| 3.3.7 mi R-203 通过靶向抑制p63调控成肌细胞增殖和分化 | 第81-86页 |
| 3.4 小结 | 第86-87页 |
| 第4章 mi R-20a-5p/20b-5p介导的调控通路对成肌细胞增殖和分化的调控 | 第87-107页 |
| 4.1 引言 | 第87页 |
| 4.2 材料与方法 | 第87-90页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第87-88页 |
| 4.2.1.1 实验用细胞 | 第87-88页 |
| 4.2.1.2 主要仪器设备 | 第88页 |
| 4.2.1.3 主要试剂 | 第88页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第88-90页 |
| 4.2.2.1 细胞培养 | 第88页 |
| 4.2.2.2 引物设计 | 第88-89页 |
| 4.2.2.3 载体构建 | 第89页 |
| 4.2.2.4 细胞转染 | 第89页 |
| 4.2.2.5 RNA和蛋白抽提 | 第89页 |
| 4.2.2.6 基因和mi RNA反转录和定量检测 | 第89页 |
| 4.2.2.7 免疫荧光和免疫印迹 | 第89-90页 |
| 4.2.2.8 染色质免疫共沉淀 | 第90页 |
| 4.2.2.9 细胞增殖检测 | 第90页 |
| 4.2.2.10 mi RNA靶标验证 | 第90页 |
| 4.2.2.11 数据统计与分析 | 第90页 |
| 4.3 结果与分析 | 第90-106页 |
| 4.3.1 mi R-20a-5p和mi R-20b-5p抑制成肌细胞增殖 | 第90-93页 |
| 4.3.2 mi R-20a-5p和mi R-20b-5p促进成肌细胞分化 | 第93-96页 |
| 4.3.3 E2F1是mi R-20a-5p和mi R-20b-5p的靶基因 | 第96-99页 |
| 4.3.4 E2F1促进成肌细胞增殖和抑制成肌细胞分化 | 第99-101页 |
| 4.3.5 E2F1直接调控mi R-17~92 和mi R-106a~363 的转录 | 第101-104页 |
| 4.3.6 mi R-20a-5p，mi R-20b-5p和E2F1在成肌细胞分化期的表达和联系 | 第104-106页 |
| 4.4 小结 | 第106-107页 |
| 第5章 mi R1403p通过靶向抑制Myomaker调控鸡成肌细胞的融合 | 第107-126页 |
| 5.1 引言 | 第107页 |
| 5.2 材料与方法 | 第107-111页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第107页 |
| 5.2.1.1 实验用动物和细胞 | 第107页 |
| 5.2.1.2 主要仪器设备 | 第107页 |
| 5.2.1.3 主要试剂 | 第107页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第107-111页 |
| 5.2.2.1 细胞培养 | 第107-108页 |
| 5.2.2.2 引物设计 | 第108-109页 |
| 5.2.2.3 载体构建 | 第109页 |
| 5.2.2.4 蛋白和RNA抽提 | 第109-110页 |
| 5.2.2.5 基因和mi RNA反转录和定量检测 | 第110页 |
| 5.2.2.6 免疫荧光 | 第110页 |
| 5.2.2.7 染色质免疫共沉淀 | 第110页 |
| 5.2.2.8 细胞增殖检测 | 第110页 |
| 5.2.2.9 mi RNA靶标验证 | 第110页 |
| 5.2.2.10 划痕试验 | 第110页 |
| 5.2.2.11 Transwell细胞迁移试验 | 第110-111页 |
| 5.2.2.12 c DNA末端快速扩增试验 | 第111页 |
| 5.2.2.13 数据统计与分析 | 第111页 |
| 5.3 结果与分析 | 第111-125页 |
| 5.3.1 鸡Myomaker基因的全长c DNA扩增和保守性分析 | 第111-112页 |
| 5.3.2 Myomaker基因在鸡骨骼肌发育过程中的表达 | 第112-113页 |
| 5.3.3 Myomaker促进鸡成肌细胞融合 | 第113-116页 |
| 5.3.4 干扰Myomaker抑制鸡成肌细胞迁移 | 第116-117页 |
| 5.3.5 鸡Myomaker的转录由一个保守的启动子E-box元件控制 | 第117-119页 |
| 5.3.6 MYOD和MYOG通过与E-box 1 结合调控Myomaker的转录 | 第119-122页 |
| 5.3.7 mi R1403p抑制Myomaker的表达和成肌细胞的融合 | 第122-124页 |
| 5.3.8 mi R1403p促进成肌细胞增殖和抑制成肌细胞的分化 | 第124-125页 |
| 5.4 小结 | 第125-126页 |
| 第6章 c-Myc通过转录调控肌肉发育相关mi RNAs影响鸡成肌细胞增殖和分化 | 第126-149页 |
| 6.1 引言 | 第126页 |
| 6.2 材料与方法 | 第126-130页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第126-127页 |
| 6.2.1.1 实验用细胞 | 第126-127页 |
| 6.2.1.2 主要仪器设备 | 第127页 |
| 6.2.1.3 主要试剂 | 第127页 |
| 6.2.2 实验方法 | 第127-130页 |
| 6.2.2.1 细胞的分离、纯化和培养 | 第127页 |
| 6.2.2.2 引物设计 | 第127-128页 |
| 6.2.2.3 RNA抽提和基因定量 | 第128页 |
| 6.2.2.4 免疫荧光和免疫印迹 | 第128页 |
| 6.2.2.5 Ch IP和Ch IP-seq试验 | 第128-129页 |
| 6.2.2.6 质粒构建和细胞转染 | 第129页 |
| 6.2.2.7 细胞增殖检测 | 第129页 |
| 6.2.2.8 c DNA末端快速扩增试验 | 第129页 |
| 6.2.2.9 数据统计与分析 | 第129-130页 |
| 6.3 结果与分析 | 第130-148页 |
| 6.3.1 鸡c-Myc基因的全长m RNA扩增和表达分析 | 第130-132页 |
| 6.3.2 c-Myc促进鸡成肌细胞增殖和抑制鸡成肌细胞分化 | 第132-134页 |
| 6.3.3 c-Myc在鸡成肌细胞增殖和分化期的Ch IP-seq分析和验证 | 第134-135页 |
| 6.3.4 c-Myc Ch IP-seq结果的GO分析 | 第135-137页 |
| 6.3.5 c-Myc peaks在mi RNAs启动子区的分布 | 第137-138页 |
| 6.3.6 c-Myc在mi RNAs启动子区结合的Ch IP-q PCR验证 | 第138-140页 |
| 6.3.7 c-Myc对肌肉和细胞发育相关mi RNAs的表达调控 | 第140-141页 |
| 6.3.8 受c-Myc调控的mi RNAs可调控成肌细胞增殖和分化 | 第141-142页 |
| 6.3.9 受c-Myc调控的mi RNAs可靶向抑制c-Myc的表达 | 第142-143页 |
| 6.3.10 c-Myc peaks在基因间lnc RNAs启动子区的分布 | 第143-144页 |
| 6.3.11 受c-Myc调控的lnc RNAs与Myomi Rs之间的互作 | 第144-146页 |
| 6.3.12 lnc-2949 和lnc-1369 是调控肌肉分化的重要候选lnc RNAs | 第146-148页 |
| 6.4 小结 | 第148-149页 |
| 第7章 全文讨论与结论 | 第149-163页 |
| 7.1 全文讨论 | 第149-161页 |
| 7.1.1 SLD鸡肌肉量下降的原因以及mi RNA在其中所起的作用 | 第149-151页 |
| 7.1.2 mi R-203 对成肌细胞增殖和分化的调控 | 第151-154页 |
| 7.1.3 mi R-20a-5p和mi R-20b-5p对成肌细胞增殖和分化的调控 | 第154-156页 |
| 7.1.4 mi R1403p通过靶向抑制Myomaker调控成肌细胞融合 | 第156-158页 |
| 7.1.5 c-Myc通过转录调控mi RNAs影响成肌细胞增殖和分化 | 第158-159页 |
| 7.1.6 骨骼肌发育中mi RNA的调控作用 | 第159-161页 |
| 7.2 论文创新之处 | 第161-162页 |
| 7.3 结论 | 第162-163页 |
| 致谢 | 第163-164页 |
| 参考文献 | 第164-180页 |
| 附录 硕博期间论文发表情况 | 第180页 |
