| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 伪狂犬病的流行病学 | 第11页 |
| 1.2 我国伪狂犬病的流行现状 | 第11-12页 |
| 1.3 病原学 | 第12页 |
| 1.3.1 病毒的结构 | 第12页 |
| 1.3.2 病毒的理化特性 | 第12页 |
| 1.4 病毒的传染特点 | 第12-13页 |
| 1.4.1 潜伏感染 | 第12页 |
| 1.4.2 隐性感染 | 第12-13页 |
| 1.4.3 显性感染 | 第13页 |
| 1.5 伪狂犬病毒的致病机理 | 第13页 |
| 1.6 伪狂犬病的诊断方法 | 第13-15页 |
| 1.6.1 动物接种试验 | 第13-14页 |
| 1.6.2 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第14页 |
| 1.6.3 免疫荧光试验(FA) | 第14页 |
| 1.6.4 聚合酶链式反应（PCR） | 第14-15页 |
| 1.6.5 基因芯片技术 | 第15页 |
| 1.7 伪狂犬病的防控 | 第15-16页 |
| 1.7.1 自繁自养 | 第15页 |
| 1.7.2 疫苗免疫 | 第15-16页 |
| 1.7.3 加强饲养管理 | 第16页 |
| 1.8 病毒重组涉及的研究方法 | 第16-18页 |
| 1.8.1 同源重组技术 | 第16-17页 |
| 1.8.2 融合PCR技术 | 第17页 |
| 1.8.3 外源基因转染细胞技术 | 第17-18页 |
| 1.8.4 病毒空斑技术 | 第18页 |
| 1.9 研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 细胞、菌种、质粒和动物 | 第19页 |
| 2.1.2 酶类相关试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 细胞培养用溶液 | 第19-20页 |
| 2.1.4 病毒DNA抽提相关溶液 | 第20页 |
| 2.1.5 细菌培养基及常用溶液 | 第20页 |
| 2.1.6 琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第20页 |
| 2.1.7 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-37页 |
| 2.2.1 PRV AH-China-2013的分离与鉴定 | 第21-23页 |
| 2.2.2 PRV AH-China-2013株的空斑纯化与TCID_(50)的测定 | 第23-24页 |
| 2.2.3 PRV AH-China-2013的致病性实验 | 第24页 |
| 2.2.4 PRV AH-China-2013主要糖蛋白基因片段的克隆与鉴定 | 第24-26页 |
| 2.2.5 PRV AH-China-2013主要糖蛋白基因序列测序结果的分析 | 第26页 |
| 2.2.6 PRV AH-China-2013 gE缺失转移质粒的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.7 绿色荧光蛋白基因EGFP的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.8 转移质粒pMD-LA-EGFP-RA的构建与表达 | 第28-31页 |
| 2.2.9 重组质粒pMD-LA-RA的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.10 转移质粒pMD-LA-EGFP-RA的构建 | 第33-35页 |
| 2.2.11 转移质粒pMD-LA-EGFP-RA基因的表达检测 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-53页 |
| 3.1 PRV的分离与鉴定 | 第37-39页 |
| 3.1.1 疑似病料的PCR扩增结果 | 第37页 |
| 3.1.2 病料接种细胞产生的细胞病变 | 第37-38页 |
| 3.1.3 病变细胞的PCR检测 | 第38-39页 |
| 3.2 PRV的空斑纯化与致病性实验 | 第39-41页 |
| 3.2.1 PRV的空斑纯化 | 第39页 |
| 3.2.2 PRV AH-China-2013 TCID_(50)的测定 | 第39-40页 |
| 3.2.3 PRV AH-China-2013的致病性实验 | 第40-41页 |
| 3.3 PRV AH-China-2013的遗传进化与分子特征分析 | 第41-49页 |
| 3.3.1 PRV AH-China-2013主要糖蛋白基因的PCR扩增 | 第41-43页 |
| 3.3.2 PRV AH-China-2013的遗传进化分析 | 第43-46页 |
| 3.3.3 PRV AH-China-2013主要糖蛋白的分子特征分析 | 第46-49页 |
| 3.4 PRV AH-China-2013 gE缺失转移质粒的构建 | 第49-53页 |
| 3.4.1 同源臂LA和RA的PCR扩增结果 | 第49-50页 |
| 3.4.2 EGFP基因表达盒的PCR扩增结果 | 第50-51页 |
| 3.4.3 重组质粒pMD-LA的酶切鉴定结果 | 第51页 |
| 3.4.4 重组质粒pMD-LA-RA的酶切鉴定结果 | 第51-52页 |
| 3.4.5 转移质粒pMD-LA-EGFP-RA的酶切鉴定结果 | 第52-53页 |
| 3.4.6 转移质粒pMD-LA-EGFP-RA中EGFP基因的表达检测 | 第53页 |
| 4 讨论与结论 | 第53-59页 |
| 4.1 讨论 | 第53-57页 |
| 4.1.1 我国猪伪狂犬病的流行趋势 | 第53-54页 |
| 4.1.2 PRV Bartha-K61疫苗免疫失败的原因分析 | 第54-55页 |
| 4.1.3 PRV AH-China-2013主要糖蛋白的突变分析 | 第55-57页 |
| 4.1.4 伪狂犬病病毒新流行毒株基因缺失疫苗的研究策略 | 第57页 |
| 4.2 结论 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 附录A：荧光质粒pEGFP-N1的图谱 | 第63-64页 |
| 附录B：pMD18-T质粒图谱 | 第64-65页 |
| 附录C：PRV-AH株gB、gC、gD、gE糖蛋白的基因序列 | 第65-69页 |
