| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 本论文常用英文缩写词 | 第7-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 概况 | 第11页 |
| 1.2 病毒的形态与理化特征 | 第11-12页 |
| 1.3 病毒的生物学特征 | 第12-13页 |
| 1.4 病毒的基因组结构与功能 | 第13-15页 |
| 1.4.1 病毒的非结构蛋白及其功能 | 第14页 |
| 1.4.2 病毒的结构蛋白及其功能 | 第14-15页 |
| 1.5 TGEV检测技术的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.5.1 病毒的分离鉴定 | 第15-16页 |
| 1.5.2 免疫电镜法 | 第16页 |
| 1.5.3 免疫荧光法技术 | 第16页 |
| 1.5.4 ELISA方法 | 第16-17页 |
| 1.5.5 核酸探针杂交检测方法 | 第17页 |
| 1.5.6 聚合酶链式反应（PCR）技术 | 第17-18页 |
| 1.5.7 免疫胶体金技术 | 第18页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第18-20页 |
| 第二章 猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定、传代培养及全基因序列分析 | 第20-36页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-31页 |
| 2.1.1 病毒、细胞与菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 实验相关试剂及配制 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.4 细胞的复苏 | 第22页 |
| 2.1.5 细胞的传代 | 第22页 |
| 2.1.6 病料的处理 | 第22页 |
| 2.1.7 病毒的繁殖 | 第22-23页 |
| 2.1.8 病毒的纯化 | 第23页 |
| 2.1.9 纯化后病毒的鉴定 | 第23-25页 |
| 2.1.9.1 引物的设计与合成 | 第23页 |
| 2.1.9.2 病毒总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.1.9.3 cDNA第一条链合成 | 第24-25页 |
| 2.1.9.4 cDNA第一链的RT-PCR扩增 | 第25页 |
| 2.1.10 病毒在PK-15细胞上的连续传代培养 | 第25-26页 |
| 2.1.11 不同代次病毒TCID50的测定 | 第26页 |
| 2.1.12 TGEV CN12株的全基因组序列的测定与分析 | 第26-31页 |
| 2.1.12.1 全基因序列引物的合成 | 第26-28页 |
| 2.1.12.2 TGEV CN12株全基因组分段RT-PCR扩增 | 第28页 |
| 2.1.12.3 PCR产物的回收与纯化 | 第28-29页 |
| 2.1.12.4 PCR纯化产物的连接 | 第29页 |
| 2.1.12.5 DH5α感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.1.12.6 连接产物转化DH5α 感受态细胞 | 第29-30页 |
| 2.1.12.7 PCR筛选阳性克隆 | 第30页 |
| 2.1.12.8 TGEV CN12株全基因序列测定与比较分析 | 第30-31页 |
| 2.2 结果与分析 | 第31-34页 |
| 2.2.1 病毒的繁殖 | 第31页 |
| 2.2.2 病毒的纯化 | 第31页 |
| 2.2.3 纯化后病毒的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.4 不同代次病毒TCID50的测定 | 第32页 |
| 2.2.5 TGEV CN12株全基因序列测定与比较分析 | 第32-34页 |
| 2.2.5.1 全基因组分段扩增结果 | 第32-33页 |
| 2.2.5.2 TGEV CN12株全基因组与序列分析 | 第33-34页 |
| 2.3 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第36-47页 |
| 3.1 材料与方法 | 第36-40页 |
| 3.1.1 毒株、细胞和菌株 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂及仪器 | 第36页 |
| 3.1.3 TGEV的繁殖 | 第36页 |
| 3.1.4 引物的设计与合成 | 第36页 |
| 3.1.5 质粒模板标准品的制备 | 第36-39页 |
| 3.1.5.1 病毒RNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.1.5.2 cDNA第一条链合成与PCR的扩增 | 第37-38页 |
| 3.1.5.3 PCR筛选阳性克隆 | 第38页 |
| 3.1.5.4 重组克隆质粒的抽提 | 第38-39页 |
| 3.1.6 实时荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第39页 |
| 3.1.7 特异性试验 | 第39页 |
| 3.1.8 敏感性试验 | 第39-40页 |
| 3.1.9 重复性试验 | 第40页 |
| 3.1.10 临床样品检测与结果分析 | 第40页 |
| 3.2 结果与分析 | 第40-44页 |
| 3.2.1 TGEV S基因的克隆鉴定及质粒模板标准品的制备 | 第40-41页 |
| 3.2.2 实时荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第41-42页 |
| 3.2.3 实时荧光定量PCR特异性试验结果 | 第42-43页 |
| 3.2.4 实时荧光定量PCR敏感性试验结果 | 第43页 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR重复性试验结果 | 第43-44页 |
| 3.2.6 临床样品检测试验结果 | 第44页 |
| 3.3 讨论 | 第44-47页 |
| 全文总结 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录 pMD18-T Simple Vector的结构图 | 第55页 |
