| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩写对照表 | 第8-14页 |
| 1 前言 | 第14-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-41页 |
| 2.1 材料 | 第17-23页 |
| 2.1.1 样品 | 第17页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第17页 |
| 2.1.3 菌种 | 第17页 |
| 2.1.4 载体 | 第17-18页 |
| 2.1.5 酶和试剂 | 第18页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.7 培养基和常用溶液的配置 | 第19-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-41页 |
| 2.2.1 蓝氏贾第虫贾第素 α-18 的原核表达及其亚细胞定位 | 第23-37页 |
| 2.2.1.1 A型蓝氏贾第虫滋养体的培养 | 第23页 |
| 2.2.1.2 基因组DNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.1.3 引物设计 | 第24页 |
| 2.2.1.4 贾第素 α-18 基因扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.1.5 PCR产物检测 | 第25页 |
| 2.2.1.6 PCR产物回收与纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.1.7 PCR纯化产物的连接 | 第26-27页 |
| 2.2.1.8 连接产物转化E.coli DH5α | 第27页 |
| 2.2.1.9 阳性克隆的筛选与PCR鉴定 | 第27页 |
| 2.2.1.10 阳性克隆质粒的抽提 | 第27-28页 |
| 2.2.1.11 阳性克隆序列的测定及分析 | 第28页 |
| 2.2.1.12 贾第素 α-18 的生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 2.2.1.13 目的基因片段粘性末端的制备 | 第29页 |
| 2.2.1.14 表达载体质粒p ET-28a(+) 的线性化 | 第29-30页 |
| 2.2.1.15 目的基因与线性化p ET-28a(+) 的连接 | 第30页 |
| 2.2.1.16 重组连接体系的转化 | 第30-31页 |
| 2.2.1.17 重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第31页 |
| 2.2.1.18 贾第素 α-18 基因的原核表达 | 第31-32页 |
| 2.2.1.19 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第32-33页 |
| 2.2.1.20 表达产物的Western blot检测 | 第33页 |
| 2.2.1.21 目的蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.1.22 纯化蛋白浓度的检测 | 第34-35页 |
| 2.2.1.23 贾第素 α-18 多克隆抗体的制备 | 第35页 |
| 2.2.1.24 免疫血清效价的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.1.25 抗血清的特异性鉴定 | 第36页 |
| 2.2.1.26 贾第素 α-18 在贾第虫滋养体内的亚细胞定位 | 第36-37页 |
| 2.2.2 蓝氏贾第虫贾第素 α-12 的原核表达及其亚细胞定位 | 第37-41页 |
| 2.2.2.1 引物设计 | 第37页 |
| 2.2.2.2 贾第素 α-12 基因扩增 | 第37-38页 |
| 2.2.2.3 PCR产物检测 | 第38页 |
| 2.2.2.4 PCR产物回收与纯化 | 第38页 |
| 2.2.2.5 PCR纯化产物的连接 | 第38页 |
| 2.2.2.6 连接产物转化E.coli DH5α | 第38页 |
| 2.2.2.7 阳性克隆的筛选与PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.2.8 阳性克隆质粒的抽提 | 第39页 |
| 2.2.2.9 阳性克隆质粒的测序 | 第39页 |
| 2.2.2.10 贾第素 α-12 的生物信息学分析 | 第39页 |
| 2.2.2.11 目的基因片段粘性末端的制备 | 第39页 |
| 2.2.2.12 目的基因与线性化载体p ET-28a(+) 的连接 | 第39页 |
| 2.2.2.13 重组连接体系的转化 | 第39页 |
| 2.2.2.14 重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 2.2.2.15 贾第素 α-12 基因的原核表达 | 第40页 |
| 2.2.2.16 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第40页 |
| 2.2.2.17 表达产物的Western blot检测 | 第40页 |
| 2.2.2.18 目的蛋白的纯化 | 第40页 |
| 2.2.2.19 纯化蛋白浓度的检测 | 第40页 |
| 2.2.2.20 贾第素 α-12 多克隆抗体的制备 | 第40页 |
| 2.2.2.21 抗血清效价的测定 | 第40页 |
| 2.2.2.22 抗血清的特异性鉴定 | 第40页 |
| 2.2.2.23 贾第素 α-12 在贾第虫滋养体内的亚细胞定位 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-57页 |
| 3.1 贾第素 α-18 的原核表达及其亚细胞定位 | 第41-51页 |
| 3.1.1 PCR产物扩增结果 | 第41页 |
| 3.1.2 阳性克隆PCR鉴定结果 | 第41-42页 |
| 3.1.3 目的基因测序结果及序列同源性比对分析 | 第42-44页 |
| 3.1.4 贾第素 α-18 的生物信息学分析 | 第44-46页 |
| 3.1.5 重组表达质粒的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.1.6 表达产物SDS-PAGE分析 | 第47-48页 |
| 3.1.7 表达产物Western-blot分析 | 第48页 |
| 3.1.8 重组蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| 3.1.9 抗血清效价的测定 | 第49-50页 |
| 3.1.10 抗血清特异性分析 | 第50页 |
| 3.1.11 贾第素 α-18 在贾第虫滋养体的亚细胞定位 | 第50-51页 |
| 3.2 贾第虫贾第素 α-12 的原核表达及其亚细胞定位 | 第51-57页 |
| 3.2.1 贾第素 α-12 基因的扩增结果 | 第51-52页 |
| 3.2.2 阳性克隆PCR鉴定结果 | 第52页 |
| 3.2.3 基因序列的测定及生物信息学分析 | 第52-54页 |
| 3.2.4 重组表达质粒的鉴定 | 第54页 |
| 3.2.5 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第54-55页 |
| 3.2.6 表达产物的Western-blot分析 | 第55页 |
| 3.2.7 重组蛋白的纯化 | 第55页 |
| 3.2.8 抗血清效价的测定 | 第55-56页 |
| 3.2.9 抗血清特异性分析 | 第56页 |
| 3.2.10 贾第素 α-12 在贾第虫滋养体的亚细胞定位 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-63页 |
| 4.1 不同宿主贾第虫A型和F型贾第素 α-18 基因的遗传变异 | 第57-58页 |
| 4.2 贾第虫贾第素 α-18 的原核表达及其亚细胞定位 | 第58-60页 |
| 4.3 贾第虫贾第素 α-12 的原核表达及其亚细胞定位 | 第60-63页 |
| 全文总结 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 附录：攻读硕士学位期间论文发表、学术会议及获奖情况 | 第70-71页 |
