摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5页 |
第1章 绪论 | 第8-21页 |
1.1 课题来源 | 第8页 |
1.2 课题背景及目的和意义 | 第8-9页 |
1.3 国内外研究现状及分析 | 第9-18页 |
1.3.1 c1orf109的研究现状 | 第9页 |
1.3.2 转录因子对启动子的调控 | 第9-12页 |
1.3.3 转录因子AP1简介 | 第12-14页 |
1.3.4 转录因子NFκB简介 | 第14-16页 |
1.3.5 转录因子c-Myc简介 | 第16-18页 |
1.4 主要研究内容 | 第18-19页 |
1.5 技术路线 | 第19-21页 |
第2章 材料与方法 | 第21-35页 |
2.1 实验材料 | 第21-25页 |
2.1.1 细胞系 | 第21页 |
2.1.2 载体及菌株 | 第21-22页 |
2.1.3 抗体 | 第22页 |
2.1.4 实验试剂及配方 | 第22-24页 |
2.1.5 实验分析软件 | 第24页 |
2.1.6 PCR扩增引物及RNAi片段序列 | 第24-25页 |
2.1.7 主要仪器设备 | 第25页 |
2.2 实验方法 | 第25-35页 |
2.2.1 启动子预测分析 | 第25-26页 |
2.2.2 重组体的构建 | 第26-29页 |
2.2.3 细胞的培养及冻存 | 第29页 |
2.2.4 细胞转染(质粒及siRNA的转染) | 第29-30页 |
2.2.5 荧光素酶报告实验 | 第30页 |
2.2.6 RNA提取 | 第30-31页 |
2.2.7 逆转录合成cDNA | 第31页 |
2.2.8 实时荧光定量PCR | 第31-32页 |
2.2.9 蛋白质的提取及Western Blot免疫印记杂交 | 第32-33页 |
2.2.10 染色质免疫共沉淀ChIP | 第33-35页 |
第3章 与c1orf109结合的转录因子预测及重组体构建 | 第35-47页 |
3.1 引言 | 第35页 |
3.2 生物信息学分析预测 | 第35-42页 |
3.2.1 数据库分析癌症中c1orf109的特性 | 第35-38页 |
3.2.2 c1orf109启动子情况及活性分析 | 第38-40页 |
3.2.3 近端启动子核心区域转录因子结合位点的生物信息学预测 | 第40-42页 |
3.3 肿瘤细胞系中c1orf109与c-Myc/NFκB-p65/AP1-Jun表达分析 | 第42-43页 |
3.4 重组体构建 | 第43-45页 |
3.4.1 转录因子c-Myc/NFκB-p65/AP1-Jun重组体构建及验证 | 第43页 |
3.4.2 c1orf109萤火虫荧光素酶重组体构建 | 第43-45页 |
3.5 讨论 | 第45-46页 |
3.6 本章小结 | 第46-47页 |
第4章 转录因子c-Myc/NFκB/AP1对c1orf109启动子的调控作用 | 第47-61页 |
4.1 引言 | 第47页 |
4.2 转录因子重组体对c1orf109调控活性研究 | 第47-50页 |
4.2.1 转录因子c-Myc对c1orf109调控活性研究 | 第48-49页 |
4.2.2 转录因子NFκB-p65对c1orf109调控活性研究 | 第49-50页 |
4.2.3 转录因子AP1-Jun对c1orf109调控活性研究 | 第50页 |
4.3 c-Myc/NFκB重组体转染对c1orf109表达的影响研究 | 第50-52页 |
4.4 沉默转录因子c-Myc/NFκB后c1orf109表达变化的研究 | 第52-54页 |
4.5 转录因子c-Myc/NFκB与c1orf109启动子区的结合研究 | 第54-56页 |
4.6 讨论 | 第56-59页 |
4.7 本章小结 | 第59-61页 |
结论 | 第61页 |
展望 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-67页 |
致谢 | 第67页 |