| 中文摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| 1. 猪瘟和猪伪狂犬病毒性疫病概述 | 第13-22页 |
| 1.1 猪瘟病毒 | 第13-19页 |
| 1.2 猪伪狂犬病毒 | 第19-22页 |
| 2. CSFV与PRV诊断技术研究进展 | 第22-27页 |
| 2.1 病毒分离 | 第22-23页 |
| 2.2 血清中和试验 | 第23页 |
| 2.3 荧光抗体染色法 | 第23页 |
| 2.4 ELISA检测 | 第23-24页 |
| 2.5 聚合酶链式反应 | 第24-27页 |
| 2.6 核酸探针杂交试验 | 第27页 |
| 3. 猪瘟和伪狂大病净化方案研究的可行性分析 | 第27-29页 |
| 3.1 国内外猪瘟和猪伪狂犬病净化的经验和思路 | 第27-28页 |
| 3.2 猪瘟和猪伪狂犬病诊断技术的提升为其净化提供技术保障 | 第28-29页 |
| 4. 本实验的目的及意义 | 第29-31页 |
| 第二章 鉴别CSF和PR野毒与疫苗单一PCR方法的建立 | 第31-47页 |
| 1 材料 | 第32-34页 |
| 1.1 病毒、细胞、质粒及菌株 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第32-33页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第33-34页 |
| 2 方法 | 第34-39页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第34-35页 |
| 2.2 病料核酸的提取 | 第35页 |
| 2.3 病毒核酸的RT-PCR/PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.4 目的基因的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.5 鉴别CSF和PR野毒与疫苗毒单一PCR方法的建立 | 第37-39页 |
| 3 结果 | 第39-45页 |
| 3.1 鉴别CSF和PR野毒与疫苗毒单一PCR方法的建立 | 第39-43页 |
| 3.2 CSFV和PRV的PCR产物的鉴定 | 第43-45页 |
| 3.3 重复性试验 | 第45页 |
| 3.4 临床样本检测 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 第三章 猪瘟二重RT-PCR和猪伪狂犬三重PCR鉴别诊断方法的建立 | 第47-62页 |
| 1 材料 | 第47-49页 |
| 1.1 病毒 | 第47-48页 |
| 1.2 主要试剂 | 第48页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第48页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第48-49页 |
| 2 方法 | 第49-53页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第49-50页 |
| 2.2 病料核酸的提取 | 第50页 |
| 2.3 PCR反应 | 第50-51页 |
| 2.4 RT-PCR反应 | 第51页 |
| 2.5 模板重组质粒的构建 | 第51页 |
| 2.6 鉴别CSFV强弱毒二重RT-PCR反应体系的建立 | 第51-52页 |
| 2.7 鉴别PR野毒与疫苗毒三重PCR反应体系的建立 | 第52-53页 |
| 2.8 鉴别CSFV强弱毒二重RT-PCR反应体系的建立 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-58页 |
| 3.1 单一PCR/RT-PCR反应条件 | 第53-54页 |
| 3.2 鉴别CSF强弱毒二重RT-PCR反应体系的建立 | 第54-56页 |
| 3.3 鉴别PR野毒与疫苗毒三重PCR反应体系的建立 | 第56-58页 |
| 3.4 多重PCR对临床病料的检测 | 第58页 |
| 4 鉴别CSF强弱毒二重RT-PCR试剂盒的组装 | 第58-60页 |
| 4.1 对照的制备 | 第58-59页 |
| 4.2 mPCR Mix的制备 | 第59页 |
| 4.3 试剂盒的成分及组装 | 第59页 |
| 4.4 试剂盒操作说明 | 第59-60页 |
| 5 讨论 | 第60-61页 |
| 6 结论 | 第61-62页 |
| 第四章 五重PCR方法的建立与初步应用 | 第62-74页 |
| 1 材料 | 第62-63页 |
| 1.1 病毒 | 第62页 |
| 1.2 主要试剂 | 第62-63页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第63页 |
| 1.4 主要实验仪器与耗材 | 第63页 |
| 2 方法 | 第63-65页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第63-64页 |
| 2.2 病料核酸的提取 | 第64页 |
| 2.3 模板重组质粒的构建 | 第64页 |
| 2.4 鉴别CSFV和PRV野毒与疫苗毒五重PCR反应体系建立 | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65-69页 |
| 3.1 鉴别CSF与PR五重PCR反应体系的建立 | 第65-67页 |
| 3.2 鉴别CSF与PR五重PCR反应的特异性试验 | 第67页 |
| 3.3 鉴别CSF与PR五重PCR反应的敏感性试验 | 第67-68页 |
| 3.4 鉴别CSF与PR五重PCR反应的重复性试验及其产物鉴定 | 第68页 |
| 3.5 鉴别CSF与PR五重PCR方法对临床病料样品的检测 | 第68-69页 |
| 4 鉴别CSF和PR野毒与疫苗毒五重PCR试剂盒的组装 | 第69-71页 |
| 4.1 对照的制备 | 第69-70页 |
| 4.2 mPCR Mix的制备 | 第70页 |
| 4.3 试剂盒的成分及组装 | 第70页 |
| 4.4 试剂盒操作说明 | 第70-71页 |
| 5 讨论 | 第71-72页 |
| 6 结论 | 第72-74页 |
| 第五章 规模化猪场CSF和PR净化方案及其应用的研究 | 第74-99页 |
| 1 材料 | 第74-75页 |
| 1.1 样本来源 | 第74-75页 |
| 1.2 主要仪器 | 第75页 |
| 1.3 主要试剂 | 第75页 |
| 1.4 全血采集后处理 | 第75页 |
| 2 方法 | 第75-87页 |
| 2.1 猪瘟和猪伪狂犬病净化方案的探索 | 第75-81页 |
| 2.2 猪瘟与猪伪狂犬ELISA检测 | 第81-85页 |
| 2.3 猪瘟与猪伪狂犬病原学检测 | 第85-87页 |
| 3 结果 | 第87-94页 |
| 3.1 规模化猪场猪群品种及免疫接种情况 | 第87页 |
| 3.2 CSFV与PRV抗体及病原学检测结果 | 第87-94页 |
| 4 分析与讨论 | 第94-98页 |
| 5 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-108页 |
| 附录一 攻读硕士学位期间以第一作者发表的论文 | 第108-110页 |
| 附录二 本文用到的部分英文缩写及含义说明 | 第110-111页 |
| 附录三 gE-ELISA包被板样品检测结果统计表模板 | 第111-112页 |
| 附录四 gB-ELISA包被板样品检测结果统计表模板 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
