| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-25页 |
| 1.1 冠状病毒 | 第9-12页 |
| 1.1.1 冠状病毒的分类 | 第9-10页 |
| 1.1.2 冠状病毒的基因组 | 第10-11页 |
| 1.1.3 冠状病毒的结构蛋白及其功能 | 第11-12页 |
| 1.2 MERS-概述 | 第12-20页 |
| 1.2.1 MERS的流行病学 | 第12-14页 |
| 1.2.2 MERS-CoV病毒粒子结构 | 第14页 |
| 1.2.3 MERS-CoV感染过程 | 第14-15页 |
| 1.2.4 MERS-CoV的受体CD26 | 第15页 |
| 1.2.5 MERS-CoV RBD与受体CD26的复合物结构 | 第15-17页 |
| 1.2.6 MERS-跨种传播和传播途径 | 第17-18页 |
| 1.2.7 MERS的治疗研究现状 | 第18-20页 |
| 1.3 抗体概述 | 第20-25页 |
| 1.3.1 抗体的分类 | 第20-21页 |
| 1.3.2 抗体的结构 | 第21-22页 |
| 1.3.3 抗体多样性的产生机制 | 第22-23页 |
| 1.3.4 抗体的发展与应用 | 第23-25页 |
| 第二章 MERS-CoV单克隆抗体的制备和中和抗体的筛选 | 第25-51页 |
| 引言 | 第25页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第25-30页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.3 常用溶液配方 | 第27-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-39页 |
| 2.2.1 重组质粒转染昆虫细胞 | 第30-31页 |
| 2.2.2 重组MERS-RBD蛋白和SARS-RBD蛋白的表达纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.3 MERS-RBD单克隆抗体的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.4 ELISA筛选分泌抗MERS-RBD抗体的单克隆细胞株 | 第33页 |
| 2.2.5 MERS-RBD单克隆抗体的纯化 | 第33-35页 |
| 2.2.6 细胞的冻存、复苏以及培养 | 第35页 |
| 2.2.7 真核细胞的转染 | 第35-36页 |
| 2.2.8 流式细胞术筛选抑制MERS-RBD蛋白与受体CD26结合的抗体 | 第36-37页 |
| 2.2.9 假病毒中和实验 | 第37-39页 |
| 2.2.10 表面等离子共振技术检测抗体与抗原亲和力 | 第39页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第39-50页 |
| 2.3.1 MERS-RBD蛋白的纯化 | 第39-41页 |
| 2.3.2 SARS-RBD蛋白的纯化 | 第41-43页 |
| 2.3.3 纯化的MERS-RBD蛋白免疫小鼠 | 第43页 |
| 2.3.4 流式细胞术筛选出抑制MERS-CoV与受体CD26结合的抗体 | 第43-46页 |
| 2.3.5 抗体的纯化 | 第46-47页 |
| 2.3.6 假病毒中和实验 | 第47-48页 |
| 2.3.7 SPR检测抗体2E6、4C2与MERS-RBD的亲和力 | 第48-50页 |
| 2.4 小结 | 第50-51页 |
| 第三章 抗体与MERS-RBD复合物结构的解析 | 第51-66页 |
| 引言 | 第51页 |
| 3.1 实验材料 | 第51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-56页 |
| 3.2.1 抗体亚型鉴定 | 第51-52页 |
| 3.2.2 抗体序列测定 | 第52页 |
| 3.2.3 抗体酶切以及Fab的纯化 | 第52-54页 |
| 3.2.4 蛋白体外结合检测(Survive) | 第54页 |
| 3.2.5 筛选MERS-RBD与抗体Fab段的复合物晶体 | 第54-55页 |
| 3.2.6 检测两种抗体结合的抗原表位之间的关系 | 第55-56页 |
| 3.3 实验结果 | 第56-63页 |
| 3.3.1 抗体序列测定 | 第56页 |
| 3.3.2 抗体酶切以及Fab的纯化 | 第56-57页 |
| 3.3.3 MERS-RBD与分别与2E6Fab、4C2Fab的体外结合 | 第57-58页 |
| 3.3.4 两种抗体(2E6、4C2)结合的抗原表位之间的关系 | 第58-61页 |
| 3.3.5 4C2Fab与MERS-RBD复合物的解析 | 第61-63页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第63-66页 |
| 第四章 抗体的人源化 | 第66-80页 |
| 引言 | 第66页 |
| 4.1 实验材料 | 第66-68页 |
| 4.2 实验方法 | 第68-74页 |
| 4.2.1 抗体基因的合成与克隆 | 第68-69页 |
| 4.2.2 感受态细胞的制备 | 第69-70页 |
| 4.2.3 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 | 第70页 |
| 4.2.4 DNA片段的切胶回收 | 第70-71页 |
| 4.2.5 酶切反应 | 第71页 |
| 4.2.6 连接反应 | 第71页 |
| 4.2.7 转化 | 第71-72页 |
| 4.2.8 菌液PCR反应鉴定阳性菌落 | 第72页 |
| 4.2.9 质粒提取 | 第72-73页 |
| 4.2.10 酶切鉴定 | 第73页 |
| 4.2.11 保菌测序 | 第73-74页 |
| 4.2.12 抗体的表达 | 第74页 |
| 4.3 实验结果 | 第74-79页 |
| 4.3.1 抗体的基因的克隆 | 第74-75页 |
| 4.3.2 抗体的表达纯化 | 第75-76页 |
| 4.3.3 4C2人源化抗体特征分析 | 第76-79页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第79-80页 |
| 第五章本文总结与展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
