| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 缩略语 | 第14-17页 |
| 文献综述 | 第17-47页 |
| 1 抵抗素 | 第17-34页 |
| 1.1 抵抗素的发现 | 第17-18页 |
| 1.2 抵抗素分子结构 | 第18-19页 |
| 1.3 抵抗素的产生部位 | 第19-20页 |
| 1.4 抵抗素生物学功能 | 第20-32页 |
| 1.4.1 抵抗素与肥胖及胰岛素抵抗 | 第20-22页 |
| 1.4.2 抵抗素与脂肪异位沉积 | 第22-24页 |
| 1.4.3 抵抗素与炎症 | 第24-26页 |
| 1.4.4 抵抗素与心血管疾病 | 第26-27页 |
| 1.4.5 抵抗素及其多态性与动脉粥样硬化 | 第27-30页 |
| 1.4.6 抵抗素与慢性肾脏疾病 | 第30页 |
| 1.4.7 抵抗素与恶性肿瘤 | 第30页 |
| 1.4.8 抵抗素与风湿性疾病 | 第30-31页 |
| 1.4.9 抵抗素与其他疾病 | 第31-32页 |
| 1.5 抵抗素受体研究 | 第32-34页 |
| 2 脂联素 | 第34-39页 |
| 2.1 脂联素的发现及其分子结构 | 第34-36页 |
| 2.2 脂联素生物学功能 | 第36-37页 |
| 2.2.1 脂联素与能量稳态 | 第36-37页 |
| 2.2.2 脂联素与代谢综合征 | 第37页 |
| 2.3 脂联素受体及其信号通路 | 第37-39页 |
| 3 MicroRNA | 第39-46页 |
| 3.1 MicroRNA结构与分类 | 第39-40页 |
| 3.2 MiRNA的转录调控与加工成熟 | 第40-41页 |
| 3.3 MiRNA的作用机制 | 第41-44页 |
| 3.4 MiRNA生物学功能 | 第44-46页 |
| 3.4.1 MiRNA与肝脏IR及脂肪沉积 | 第44-45页 |
| 3.4.2 MiRNA参与骨骼肌及心肌的发育及脂肪代谢 | 第45页 |
| 3.4.3 MiRNA与其他疾病 | 第45-46页 |
| 4 本研究目的与意义 | 第46-47页 |
| 第一章 差异表达miRNA筛选与分析 | 第47-56页 |
| 1 前言 | 第47-48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第48页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第48页 |
| 2.1.3 相关试剂及试剂盒 | 第48页 |
| 2.1.4 相关溶液配制 | 第48-49页 |
| 2.1.5 相关生物学软件 | 第49页 |
| 2.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 2.2.1 小鼠处理 | 第49页 |
| 2.2.2 RNA样品准备 | 第49页 |
| 2.2.3 血糖测定 | 第49-50页 |
| 2.2.4 miRNA芯片制备 | 第50页 |
| 2.2.5 芯片清洗及扫描 | 第50页 |
| 2.2.6 数据提取及分析 | 第50页 |
| 2.2.7 实时定量RT-PCR验证 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-53页 |
| 3.1 重组抵抗素处理小鼠血糖测定结果 | 第51-52页 |
| 3.2 miRNA芯片结果 | 第52页 |
| 3.3 芯片数据定量验证 | 第52页 |
| 3.4 差异表达miRNA靶基因预测 | 第52-53页 |
| 3.5 差异表达miRNA信号通路分析 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 第二章 miR-145在肝脏胰岛素抵抗中作用机制 | 第56-76页 |
| 1 前言 | 第56-57页 |
| 2 材料与方法 | 第57-65页 |
| 2.1 实验材料 | 第57-60页 |
| 2.1.1 实验动物及细胞系 | 第57页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第57页 |
| 2.1.3 试剂及试剂盒 | 第57-58页 |
| 2.1.4 相关溶液配制 | 第58-59页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第59-60页 |
| 2.1.6 相关生物学软件 | 第60页 |
| 2.2 实验方法 | 第60-65页 |
| 2.2.1 细胞培养及传代 | 第60页 |
| 2.2.2 细胞瞬时转染 | 第60页 |
| 2.2.3 包含miRNA的细胞总RNA的提取 | 第60-61页 |
| 2.2.4 基因组DNA提取 | 第61页 |
| 2.2.5 cDNA的合成 | 第61页 |
| 2.2.6 启动子双荧光素酶报告载体构建 | 第61-62页 |
| 2.2.7 双荧光素酶报告系统活性检测 | 第62页 |
| 2.2.8 IRS-13'UTR的双荧光素酶报告载体构建 | 第62页 |
| 2.2.9 感受态细胞制备及转化 | 第62页 |
| 2.2.10 质粒DNA的大量提取 | 第62页 |
| 2.2.11 实时荧光定量PCR | 第62-63页 |
| 2.2.12 Western Blot | 第63-64页 |
| 2.2.13 双荧光素酶活性测定 | 第64页 |
| 2.2.14 染色质免疫共沉淀 | 第64-65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-74页 |
| 3.1 抵抗素在细胞及活体水平上调miR-145的表达 | 第65-66页 |
| 3.2 miR-145超表达抑制葡萄糖吸收 | 第66-67页 |
| 3.3 miR-145与IRS-1基因3'UTR的靶向结合 | 第67-68页 |
| 3.4 miR-145超表达损伤胰岛素信号转导 | 第68-69页 |
| 3.5 p65直接结合在miR-145的启动子区 | 第69-72页 |
| 3.5.1 miR-145启动子克隆与分析 | 第69-70页 |
| 3.5.2 p65与miR-145启动子的直接结合 | 第70-71页 |
| 3.5.3 p65对miR-145启动子活性的影响 | 第71-72页 |
| 3.6 p65对抵抗素上调miR-145表达的影响 | 第72-74页 |
| 3.6.1 p65的过表达对抵抗素上调miR-145的影响 | 第72-73页 |
| 3.6.2 抵抗素上调miR-145对p65的依赖性 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-76页 |
| 第三章 miR-34a在脂肪异位沉积中作用机制 | 第76-104页 |
| 1 前言 | 第76-78页 |
| 2 材料与方法 | 第78-83页 |
| 2.1 实验材料 | 第78-79页 |
| 2.1.1 实验动物及细胞系 | 第78页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第78页 |
| 2.1.3 实验试剂及试剂盒 | 第78页 |
| 2.1.4 抗体 | 第78页 |
| 2.1.5 实验相关溶液配制 | 第78-79页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第79页 |
| 2.1.7 相关生物学软件 | 第79页 |
| 2.2 实验方法 | 第79-83页 |
| 2.2.1 油红O染色 | 第79页 |
| 2.2.2 线粒体染色 | 第79-80页 |
| 2.2.3 线粒体膜电位检测 | 第80-81页 |
| 2.2.4 线粒体数量定量检测 | 第81页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR | 第81页 |
| 2.2.6 启动子报告载体构建 | 第81-82页 |
| 2.2.7 AdipoR2基因3'UTR的双荧光素酶报告载体构建 | 第82页 |
| 2.2.8 组织甘油三酯测定 | 第82页 |
| 2.2.9 数据统计及分析 | 第82-83页 |
| 3 结果与分析 | 第83-99页 |
| 3.1 抵抗素显著上调miR-34a表达 | 第83-84页 |
| 3.2 miR-34a增加HepG2细胞TG含量 | 第84-85页 |
| 3.3 miR-34a对线粒体数量的影响 | 第85-87页 |
| 3.4 miR-34a对线粒体膜电位的影响 | 第87页 |
| 3.5 miR-34a对线粒体功能影响 | 第87-89页 |
| 3.6 miR-34a调控肝脏脂肪代谢的靶基因 | 第89-91页 |
| 3.6.1 miR-34a靶基因预测 | 第89页 |
| 3.6.2 miR-34a靶基因报告载体构建与活性分析 | 第89-90页 |
| 3.6.3 miR-34a对AdipoR2表达的影响 | 第90-91页 |
| 3.7 超表达AdipoR2能够挽救miR-34a引起的线粒体数量下调 | 第91-92页 |
| 3.8 miR-34a调控细胞线粒体数量及脂肪沉积的分子机制 | 第92-95页 |
| 3.8.1 miR-34a抑制AdipoR2/PPARa通路 | 第92-93页 |
| 3.8.2 miR-34a损伤AMPK信号通路传导 | 第93-94页 |
| 3.8.3 miR-34a通过Sirt1-PGC-1α-NRF1减少线粒体的生成 | 第94-95页 |
| 3.9 抵抗素对miR-34a的转录调控 | 第95-99页 |
| 3.9.1 miR-34a启动子的克隆与活性分析 | 第95-97页 |
| 3.9.2 CEPBp的干扰 | 第97-98页 |
| 3.9.3 干扰C/EBPB对miR-34a表达的影响 | 第98页 |
| 3.9.4 C/EBPβ对miR-34a启动子的结合 | 第98-99页 |
| 4 讨论 | 第99-104页 |
| 结论与创新点 | 第104-106页 |
| 1 结论 | 第104-105页 |
| 2 创新点 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-123页 |
| 附表1 | 第123-126页 |
| 附表2 | 第126-128页 |
| 附表3 | 第128-129页 |
| 研究生期间发表论文情况 | 第129-130页 |
| 致谢 | 第130页 |
