| 摘要 | 第8-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 符号说明 | 第17-19页 |
| 前言 | 第19-23页 |
| 材料和方法 | 第23-36页 |
| 1. 实验材料 | 第23-27页 |
| 1.1 细胞系和质粒 | 第23页 |
| 1.2 细胞培养及冻存和转染所需试剂 | 第23页 |
| 1.3 蛋白提取所需试剂 | 第23-24页 |
| 1.4 RNA提取及PCR所需试剂 | 第24页 |
| 1.5 质粒构建及质粒提取所需试剂 | 第24页 |
| 1.6 Western blotting所需试剂及抗体 | 第24-26页 |
| 1.7 免疫组化实验所需试剂及抗体 | 第26页 |
| 1.8 其他试剂 | 第26-27页 |
| 2. 主要试验仪器 | 第27-28页 |
| 3. 实验方法 | 第28-36页 |
| 3.1 细胞培养 | 第28-29页 |
| 3.2 细胞转染 | 第29页 |
| 3.3 质粒构建并转化提取鉴定 | 第29-30页 |
| 3.4 逆转录病毒的制备及细胞感染 | 第30-31页 |
| 3.5 总RNA提取 | 第31页 |
| 3.6 逆转录和实时定量PCR | 第31页 |
| 3.7 总蛋白提取 | 第31-32页 |
| 3.8 Western blotting | 第32页 |
| 3.9 免疫共沉淀实验 | 第32-33页 |
| 3.10 免疫组织化学染色 | 第33页 |
| 3.11 放线菌酮示踪实验 | 第33-34页 |
| 3.12 蛋白酶体抑制实验 | 第34页 |
| 3.13 MTT实验 | 第34页 |
| 3.14 细胞划痕实验 | 第34页 |
| 3.15 ATP和乳酸含量检测 | 第34-35页 |
| 3.16 统计数据处理 | 第35-36页 |
| 结果 | 第36-42页 |
| 1. FBXW7下调ENO1蛋白的表达 | 第36-38页 |
| 1.1 FBXW7基因敲除对ENO1表达的影响 | 第36页 |
| 1.2 FBXW7基因沉默对ENO1表达的影响 | 第36-37页 |
| 1.3 FBXW7基因过表达对ENO1蛋白的影响 | 第37-38页 |
| 1.4 结肠癌组织标本中FBXW7和ENO1蛋白表达相关性分析 | 第38页 |
| 2. FBXW7促进ENO1通过泛素化蛋白酶体途径降解 | 第38-40页 |
| 2.1 FBXW7能够结合ENO1 | 第38-39页 |
| 2.2 FBXW7缺失延长ENO1的半衰期 | 第39页 |
| 2.3 FBXW7通过GSK3β依赖的蛋白酶体途径促进ENO1降解 | 第39页 |
| 2.4 FBXW7促进ENO1的泛素化 | 第39-40页 |
| 3. FBXW7调节ENO1影响细胞生物学功能 | 第40-42页 |
| 3.1 FBXW7负调控ENO1影响细胞内CCL20的表达 | 第40-41页 |
| 3.2 FBXW7负调控ENO1影响细胞ATP和乳酸的产生 | 第41页 |
| 3.3 FBXW7负调控ENO1影响肿瘤细胞增殖和迁移能力 | 第41-42页 |
| 讨论 | 第42-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 附图 | 第45-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第62-63页 |
| 附件 | 第63页 |
