| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 引言 | 第12-15页 |
| 1.1 灰霉病的发生与危害 | 第12页 |
| 1.2 拟南芥抗病相关基因的研究现状 | 第12-13页 |
| 1.3 拟南芥抗灰葡萄孢的分子机制研究现状 | 第13-14页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-34页 |
| 2.1 供试拟南芥、菌株及载体 | 第15页 |
| 2.2 供试试剂 | 第15页 |
| 2.3 主要试验仪器 | 第15-16页 |
| 2.4 供试培养基、营养液、染色液及溶液 | 第16-17页 |
| 2.4.1 供试培养基 | 第16页 |
| 2.4.2 拟南芥营养液配制 | 第16-17页 |
| 2.4.3 溶液配制 | 第17页 |
| 2.5 拟南芥的种植 | 第17-18页 |
| 2.6 拟南芥DNA、总RNA的提取及cDNA合成 | 第18-19页 |
| 2.6.1 拟南芥基因组DNA的提取 | 第18页 |
| 2.6.2 拟南芥总RNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.6.3 RNA的纯化 | 第19页 |
| 2.6.4 cDNA第一链的合成 | 第19页 |
| 2.7 T1N6_22 基因的生物信息学分析 | 第19-20页 |
| 2.8 T1N6_22 基因的表达分析 | 第20页 |
| 2.8.1 不同组织部位中T1N6_22 基因的表达分析 | 第20页 |
| 2.8.2 不同生长时期T1N6_22 基因的表达分析 | 第20页 |
| 2.9 T1N6_22 基因与SA、JA/ET信号途径的关系 | 第20-22页 |
| 2.9.1 对灰葡萄孢的抗病性测定 | 第20-21页 |
| 2.9.2 对Pst DC3000 的抗病性测定 | 第21页 |
| 2.9.3 灰葡萄孢和Pst DC3000 对双突变体抗病相关基因的影响 | 第21-22页 |
| 2.10 T1N6_22 基因的亚细胞定位分析 | 第22-25页 |
| 2.10.1 亚细胞定位载体构建 | 第22-24页 |
| 2.10.2 农杆菌GV3101 感受态的制备及转化 | 第24页 |
| 2.10.3 T1N6_22 基因的亚细胞定位分析 | 第24-25页 |
| 2.11 T1N6_22 基因的组织定位分析 | 第25-27页 |
| 2.11.1 组织定位载体构建 | 第25-27页 |
| 2.11.2 拟南芥的遗传转化及阳性苗的筛选 | 第27页 |
| 2.11.3 T1N6_22 基因在拟南芥中的组织定位观察 | 第27页 |
| 2.12 T1N6_22 基因的原核表达分析 | 第27-31页 |
| 2.12.1 原核表达载体构建 | 第27-30页 |
| 2.12.2 T1N6_22 基因的原核表达分析 | 第30-31页 |
| 2.13 T1N6_22 基因融合FLAG标签的载体构建 | 第31-34页 |
| 2.13.1 T1N6_22 基因的克隆 | 第31页 |
| 2.13.2 T1N6_22 基因片段的制备 | 第31页 |
| 2.13.3 pCM1307-FLAG载体片段的制备 | 第31页 |
| 2.13.4 T1N6_22 基因与载体的连接 | 第31-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-56页 |
| 3.1 T1N6_22 基因的生物信息学分析 | 第34-36页 |
| 3.2 T1N6_22 基因的表达分析 | 第36-37页 |
| 3.2.1 不同组织部位中T1N6_22 基因的表达分析 | 第36页 |
| 3.2.2 不同生长时期T1N6_22 基因的表达分析 | 第36-37页 |
| 3.3 T1N6_22 基因与SA、JA/ET信号途径的关系 | 第37-43页 |
| 3.3.1 T1N6_22 基因与SA、JA/ET信号途径关键基因在抗葡萄孢侵染中的关系 | 第37-38页 |
| 3.3.2 T1N6_22 基因与 SA、JA/ET 信号途径关键基因在 Pst DC3000 侵染中的关系 | 第38-39页 |
| 3.3.3 灰葡萄孢对双突变体中抗病相关基因表达的影响 | 第39-41页 |
| 3.3.4 Pst DC3000 对双突变体中抗病相关基因表达的影响 | 第41-43页 |
| 3.4 T1N6_22 基因的亚细胞定位分析 | 第43-46页 |
| 3.4.1 T1N6_22 基因亚细胞定位载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.4.2 T1N6_22 基因的亚细胞定位分析 | 第44-46页 |
| 3.5 T1N6_22 基因的组织定位分析 | 第46-50页 |
| 3.5.1 T1N6_22 基因组织载体的构建 | 第46-48页 |
| 3.5.2 T1N6_22pro::GUS转基因植株的获得及鉴定 | 第48页 |
| 3.5.3 T1N6_22 基因的组织定位观察 | 第48-50页 |
| 3.6 T1N6_22 基因原核表达分析 | 第50-54页 |
| 3.6.1 T1N6_22 基因原核表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 3.6.2 T1N6_22 蛋白原核表达菌株的获得与验证 | 第51-52页 |
| 3.6.3 不同IPTG诱导浓度对T1N6_22 蛋白表达的影响 | 第52-53页 |
| 3.6.4 不同诱导时间对 T1N6_22 蛋白表达的影响 | 第53页 |
| 3.6.5 T1N6_22 蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| 3.7 T1N6_22 基因融合FLAG标签的载体构建 | 第54-56页 |
| 3.7.1 T1N6_22 基因的克隆 | 第54页 |
| 3.7.2 T1N6_22 基因融合标签FLAG标签的载体构建 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 4.1 T1N6_22 基因的表达模式 | 第56页 |
| 4.2 T1N6_22 基因与SA、JA途径的调控关系 | 第56-57页 |
| 4.3 T1N6_22 蛋白的原核表达及纯化 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 作者简历 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
