| 致谢 | 第4-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩写 | 第11-15页 |
| 第1章 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 前言 | 第15-18页 |
| 1.2 研究目的 | 第18-19页 |
| 1.2.1 主要科学问题 | 第18-19页 |
| 1.2.2 研究目的及意义 | 第19页 |
| 1.3 研究路线 | 第19-21页 |
| 1.3.1 功能研究技术路线 | 第19-20页 |
| 1.3.2 GPCR结晶研究技术路线 | 第20-21页 |
| 第2章 由胞外段介导的胰高血糖素样肽-1 受体激活的具体机制研究 | 第21-57页 |
| 2.1 前言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.2.1 实验试剂与材料 | 第21-22页 |
| 2.2.2 实验所用菌株，载体与细胞 | 第22页 |
| 2.2.3 实验所用多肽 | 第22页 |
| 2.2.4 实验所需仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.5.实验所用试剂具体配方 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-32页 |
| 2.3.1 GLP-1R基因合成优化 | 第23-24页 |
| 2.3.2 克隆构建 | 第24-28页 |
| 2.3.3 AD293和HTL细胞的培养 | 第28页 |
| 2.3.4 细胞内环磷酸腺苷（CAMP）含量测定（激活G蛋白信号通路能力测定） | 第28-29页 |
| 2.3.5 细胞内受体招募阻遏蛋白能力测定（TANGO实验） | 第29-30页 |
| 2.3.6 GLP-1R胞外段（ECD）与跨膜段（TMD）共转系统建立 | 第30-31页 |
| 2.3.7 用 Western Blot 测定蛋白表达量 | 第31-32页 |
| 2.3.8 数据分析 | 第32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-53页 |
| 2.4.1 串联在全长受体N端的GLP-1 或者EX4多肽N端截短后仍然能够介导GLP-1R激活G蛋白和阻遏蛋白信号通路 | 第32-38页 |
| 2.4.2 将GLP-1R上面第347位半胱氨酸突变为赖氨酸或者精氨酸会使受体变成偏向G蛋白信号通路的受体，且该突变还能挽回融合系统中截短多肽所丧失的功能 | 第38-43页 |
| 2.4.3 游离的ECD在全长多肽的作用下会与TMD相互作用而激活下游信号通路 | 第43-47页 |
| 2.4.4 GLP-1R胞外环（EC LOOP）作为TMD与ECD和多肽的相互作用界面 | 第47-53页 |
| 2.5 讨论 | 第53-57页 |
| 第3章 极性口袋重组为B类GPCR自我激活的共同机制 | 第57-90页 |
| 3.1 前言 | 第57页 |
| 3.2 实验材料 | 第57-59页 |
| 3.2.1 实验试剂与材料 | 第57-58页 |
| 3.2.2 实验所用菌株，载体与细胞 | 第58页 |
| 3.2.3 实验所用多肽 | 第58页 |
| 3.2.4 实验所用野生型受体质粒及其他相关质粒 | 第58页 |
| 3.2.5 实验所需仪器 | 第58-59页 |
| 3.2.6 实验所用试剂具体配方 | 第59页 |
| 3.3 实验方法 | 第59-66页 |
| 3.3.1 蛋白基因合成优化 | 第59-64页 |
| 3.3.2 克隆构建 | 第64页 |
| 3.3.3 AD293, HTL, 293T细胞的培养 | 第64-65页 |
| 3.3.4 细胞内环磷酸腺苷（CAMP）含量测定（激活G蛋白信号通路能力测定） | 第65页 |
| 3.3.5 细胞内受体招募阻遏蛋白能力测定（TANGO实验） | 第65页 |
| 3.3.6 用WESTERN BLOT测定GCGR跨膜段蛋白表达量 | 第65-66页 |
| 3.3.7 全长GCGR在细胞膜上表达量检测 | 第66页 |
| 3.3.8 数据分析 | 第66页 |
| 3.4 实验结果 | 第66-87页 |
| 3.4.1 F345突变成亲水性氨基酸能有效激活受体 | 第66-70页 |
| 3.4.2 由F345组成的疏水区域发挥主要负性调节GCGR活性的作用 | 第70-76页 |
| 3.4.3 激活G蛋白信号通路的的突变同时也能激活阻遏蛋白信号通路 | 第76-78页 |
| 3.4.4 破坏保守的极性口袋能够引起B类GPCR自我激活 | 第78-87页 |
| 3.5 讨论 | 第87-90页 |
| 第4章 激活态甲状旁腺激素受体晶体结构研究 | 第90-125页 |
| 4.1 前言 | 第90-91页 |
| 4.2 实验材料 | 第91-93页 |
| 4.2.1 实验试剂与材料 | 第91页 |
| 4.2.2 实验载体与细胞 | 第91-92页 |
| 4.2.3 实验所需仪器 | 第92页 |
| 4.2.4.实验所用试剂具体配方 | 第92-93页 |
| 4.3 实验方法 | 第93-103页 |
| 4.3.1 全长PTH1R蛋白基因合成优化 | 第93-94页 |
| 4.3.2 DH10 BAC感受态制备 | 第94页 |
| 4.3.3 杆状病毒质粒（BACMID）制备 | 第94-95页 |
| 4.3.4 昆虫表达系统制备病毒 | 第95-97页 |
| 4.3.5 哺乳动物细胞感染病毒表达蛋白 | 第97页 |
| 4.3.6 蛋白纯化 | 第97-98页 |
| 4.3.7 蛋白性质检测 | 第98-99页 |
| 4.3.8 低温脂立方相（LCP）结晶实验 | 第99-100页 |
| 4.3.9 晶体筛选池液的配置及晶体的进一步优化 | 第100-103页 |
| 4.4 实验结果 | 第103-123页 |
| 4.4.1 不同物种PTH1R的表达与性质 | 第103-109页 |
| 4.4.2 GG双突变显著提高融合蛋白的表达及性质 | 第109页 |
| 4.4.3 融合蛋白的N端可溶性蛋白片段筛选 | 第109-110页 |
| 4.4.4 多肽与跨膜段之间半胱氨酸交联(二硫键形成) | 第110-111页 |
| 4.4.5 串联多肽的筛选 | 第111-112页 |
| 4.4.6 表达质粒中C端尾巴的确定 | 第112-113页 |
| 4.4.7 融合蛋白稳定性检测 | 第113-118页 |
| 4.4.8 使用新的去垢剂来稳定蛋白 | 第118-120页 |
| 4.4.9 在GDN新去垢剂的基础上筛选PH以进一步提高蛋白稳定性 | 第120-121页 |
| 4.4.10 低温LCP结晶实验 | 第121-123页 |
| 4.5 讨论 | 第123-125页 |
| 第5章 结论与讨论 | 第125-128页 |
| 参考文献 | 第128-134页 |
| 作者简历 | 第134-135页 |
